[发明专利]用于富集纯化结核分枝杆菌的纳米磁珠的制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于富集纯化结核分枝杆菌的纳米磁珠的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)向装有Fe₃O₄纳米粒子的容器中加入无水乙醇，室温下超声分散，再加入氨水加热搅拌反应，在搅拌的过程中缓慢滴加正硅酸四乙酯，持续反应10-12h，进行磁分离，用无水乙醇和去离子水交替清洗2-3次至溶液呈中性，60-80℃真空干燥得到Fe₃O₄/SiO₂纳米粒子；

(2)将步骤(1)得到的Fe₃O₄/SiO₂纳米粒子超声分散在无水乙醇中，再加入蒸馏水和无水乙醇的混合液，在25-30℃水浴搅拌下缓慢加入γ-氨丙基-3乙氧基硅烷，反应6-8h后，进行磁分离，用无水乙醇超声洗涤3-4次，60-80℃真空干燥得到表面氨基化改性的Fe₃O₄/SiO₂纳米粒子；

(3)向步骤(2)得到的Fe₃O₄/SiO₂纳米粒子中加入N,N-二甲基甲酰胺，超声分散15-30min，加入丁二酸酐溶液室温搅拌8-15h，进行磁分离，用无水乙醇洗涤3-5次，60-80℃真空干燥得到丁二酸酐接枝氨基化的磁性纳米粒子；

(4)将步骤(3)得到的丁二酸酐接枝氨基化的磁性纳米粒子加蒸馏水超声分散3-8min，再加入1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温下水浴振荡活化反应0.5-1h，再加入碱性品红溶液，室温振荡反应20-26h，进行磁分离，用无水乙醇和蒸馏水反复洗涤至洗涤液中不显红色，40-60℃真空干燥即得纳米磁珠。

2.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(1)所述超声时间为15-30min，搅拌反应温度为40-50℃，搅拌反应速度为300-800rpm。

3.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(2)中所述蒸馏水和无水乙醇的体积比为1:70-80。

4.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(3)中所述丁二酸酐溶液是将3g丁二酸酐溶于10mL DMF制备所得。

5.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(4)所述1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐的质量浓度为30mg·mL^-1。

6.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(4)所述N-羟基琥珀酰亚胺的质量浓度为30mg·mL^-1。

7.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(4)中所述1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1-3:1。

8.根据权利要求1所述的利用纳米磁珠富集纯化结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤(4)中所述碱性品红溶液的质量浓度为1mg·mL^-1。

9.一种权利要求1所述的纳米磁珠的应用，其特征在于用于富集纯化结核分枝杆菌。