[发明专利]一种肥胖基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种肥胖基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述试剂盒包括四对扩增引物、多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增肥胖基因多态性位点，包括rs9939609位点、rs17817449位点、rs1477196位点和/或rs8050136位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增FTO的四个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种肥胖基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用，属于临床检测试剂盒领域。

背景技术

近年来的科学研究表明，肥胖不仅与外在的生活方式有关，更与个体的遗传因素，即肥胖基因有关。肥胖基因包括与脂肪量和肥胖相关(fat mass and obesityassociated，FTO)、瘦素(leptin，LEP)等。其中FTO基因是一个与肥胖密切相关的等位基因，位于16q12.2染色体上，编码一个2-酮戊二酸(2-OG)的Fe(II)依赖性双加氧酶，参与饮食调节、能量平衡、脂肪代谢及转录的调控。FTO蛋白主要在脂肪、胰腺、肝脏、脑组织等与体内能量代谢相关的组织中表达。FTO基因功能丧失会导致发育迟缓，消瘦，代谢率增高和贪食。

国内外大量的研究表明，FTO基因多态性与体质量指数(BMI)、肥胖、糖尿病、代谢综合征显著关联，与高血压、C-反应蛋白、动脉粥样硬化及多系统肿瘤的发病亦相关。FTO是目前公认的与肥胖关联最强最确切的基因，在西欧、北美、南非及部分亚裔人群、非裔美国人等均得到证实，是在欧洲人群中唯一的、重复成功的肥胖易感基因。FTO基因多态性与复杂疾病的关联研究是近几年的研究热点。

2007年，Frayling等率先报道了FTO基因rs9939609位点携带A等位基因与白色人种肥胖高度相关，同时证实增加了患2型糖尿病的易感性。随后，FTO与BMI及肥胖的关联陆续在不同的种族的人群中得到重复验证。迄今为止，FTO依然是对BMI影响最大的基因。Attaoua 等研究揭示基因在胰岛素抵抗和代谢综合征中发挥一定的作用。新近美国社区动脉粥样硬化危险因素ARIC研究发现：美国白人而非美国黑人，FTO基因位点rs9939609、rs17817449 多态性与认知功能下降有关，且独立于年龄、性别、受教育程度、糖尿病、高血压及BMI。 FTO基因位点rs 8050136与2型糖尿病的发病之间具有显著的相关性，且与中国儿童肥胖之间也有很强的关联性。2009年丹麦一项大规模队列研究发现：FTO基因多态性与研究人群的全因死亡率增加相关，且独立于肥胖。不仅如此，遗传性的肥胖还会导致代谢综合征(MS) 的发生，FTO基因多态性的多个突变与乳腺癌易感性也已被证实有明确的相关性，亚洲人中，rs1477196的G等位基因与乳腺癌的发病呈正相关。冠心病、糖尿病等病症的患者往往合并肥胖、高血压、高血脂症和糖代谢异常等问题，临床已证实肥胖是影响冠心病的独立危险因素，冠心病和肥胖都属于多基因遗传病。已有研究证实肥胖基因FTO多态性与C-反应蛋白(CRP)显著相关，CRP作为心血管疾病预测因子，说明肥胖基因FTO多态性与冠心病有着一定的关联。

鉴于目前全民对于健康问题的空前关注，并且随着基因技术的发展。开发设计一款对于肥胖基因多态性的检测试剂盒，不仅对于普通的肥胖情况可以进行检测评估，并且也可以对于与肥胖明显相关的疾病，如冠心病、糖尿病等进行临床预测，具有良好的市场推广前景。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种肥胖基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的肥胖基因多态性检测试剂盒及其应用的技术方案如下：