[发明专利]一种利用转铁蛋白受体1评价低剂量伽马射线辐射损伤的方法

权利要求书

1.一种利用转铁蛋白受体1评价低剂量伽马射线辐射损伤的方法，利用人体外周血AHH1淋巴细胞中TFRC1对低剂量伽马射线辐射非常敏感的特性，根据人体外周血AHH1淋巴细胞接受的低剂量伽马射线辐射剂量与TFRC1的相对表达量的上调率的剂量-效应关系，通过检测人体外周血AHH1淋巴细胞中TFRC1的相对表达量的上调率，评估低剂量伽马射线辐射对人体血液的生物损伤，其特征在于，具体步骤包括：

（1）人体外周血AHH1淋巴细胞的培养；

（2）伽马射线辐射；

（3）TFRC1的相对表达量上调率的检测；

（4）辐射损伤综合评价；

所述的人体外周血AHH1淋巴细胞的培养具体方法为：

人体外周血淋巴细胞AHH1，用含10%血清IMDM培养液中，置于37℃，5% 二氧化碳培养箱，每隔3 天换一次培养液，每隔3-5天进行一次细胞传代，取对数生长期细胞进行实验；

所述的伽马射线辐射具体方法为：

将细胞密度调整为6×10⁵细胞/ml，再取用6×10⁶个细胞，将其移至新培养瓶，放在剂量率为14μGy/h的伽马射线下进行持续辐照，分别收集持续辐照0、7、21、42和56天的外周血AHH1淋巴细胞，辐照剂量分别为0、2.4、7.2、14.1和18.8 mGy，

所述的TFRC1的相对表达量上调率的检测具体方法为：

将收集的受过低剂量伽马射线辐照的外周血AHH1淋巴细胞进行蛋白提取、总蛋白浓度测定、蛋白质变性、凝胶电泳、转膜、免疫反应、化学发光反应、凝胶成像扫描分析、最后进行TFRC1的相对表达量上调率分析，

TFRC1相对表达量上调率按公式（1）进行计算，

（1）

所述辐射损伤综合评价的方法是：

采用TFRC1相对表达量上调率来评估低剂量伽马射线辐射对人体外周血的生物损伤，当人体外周血淋巴细胞AHH-1中的TFRC1相对表达量上调率小于10%时，表明低剂量伽马射线辐射对人体外周血无损伤；当人体外周血淋巴细胞AHH-1TFRC1相对表达量上调率大于10%而小于30%时，此时的低剂量伽马射线辐射的损伤等级为Ⅰ级；当人体外周血淋巴细胞AHH-1中的TFRC1相对表达量上调率大于30%而小于60%时，此时的低剂量伽马射线辐射的损伤等级为Ⅱ级；当人体外周血淋巴细胞AHH-1中的TFRC1相对表达量上调率大于60%时，此时的低剂量伽马射线辐射的损伤等级为Ⅲ级。

2.根据权利要求1所述的一种利用转铁蛋白受体1评价低剂量伽马射线辐射损伤的方法，其特征在于，所述的蛋白提取具体步骤如下：

倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液，每瓶细胞加3ml 4^oC预冷的PBS平放轻轻摇动1min洗涤，然后弃去洗液，重复以上操作两次，洗去培养液，将PBS弃净后把培养瓶置于冰上，1ml裂解液加10ulPMSF，摇匀置于冰上，每瓶加400ul含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，裂解完后，移至离心管，离心5min，上清于离心管保存。

3.根据权利要求1所述的一种利用转铁蛋白受体1评价低剂量伽马射线辐射损伤的方法，其特征在于，所述的总蛋白浓度测定的具体步骤如下：

将0.2 mg/ml BSA 标准品溶液加稀释液依次稀释成0、5、10、20、50、100、150和200 μg/ml 的标准品溶液，然后测定它们在562 nm下的吸光度值，绘制标准曲线，测定每个样品溶液562 nm下的吸光度值后，最后通过标准曲线计算出样品中蛋白质的浓度。

4.根据权利要求1所述的一种利用转铁蛋白受体1评价低剂量伽马射线辐射损伤的方法，其特征在于，所述的蛋白质变性的具体步骤如下：

将蛋白质溶液按照4:1的比例加入5×蛋白质上样缓冲液，沸水浴变性15 min，放入-20℃冰箱保存备用。