[发明专利]一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法

权利要求书

1.一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，其特征在于，包括：

步骤S101，红树林湿地现状调查，包括红树林湿地相关参数和污染物相关参数；

步骤S102，确定指示微生物，查阅文献选出指示红树林沉积物重金属污染的微生物群落；

步骤S103，选定理想参照点，选定不受工业废水污染或最低限度受污染的红树林区域作为理想参照点；

步骤S104，建立红树林沉积物样品采集方法，明确微生物分析方法，其包括样品DNA提取方法、PCR扩增方法和克隆文库构建方法；

步骤S105，选定指示微生物指标评价因子，以指示微生物基因拷贝数、多样性指数和优势菌群占比作为评价因子；

步骤S106，确定微生物指标评价因子的权重W_i；

步骤S107，计算微生物指标评价因子的评价比值I_i；

步骤S108，计算评价指标P，划分评价等级，根据评价等级对红树林湿地沉积物健康状况进行评估。

2.根据权利要求1所述的一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，其特征在于，所述的红树林湿地相关参数包括植物种类、气候条件、水淹环境和沉积物理化特征；污染物相关参数调查包括污染物来源、主要污染物类型，明确待测红树林的主要污染物为重金属。

3.根据权利要求1所述的一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，其特征在于，基于文献调查，明确硫酸盐还原菌为红树林沉积物重金属污染的指示微生物，具体判断标准如下：通过Spearman相关分析，指示微生物的基因拷贝数和多样性指数应与重金属浓度在显著性水平P＜0.05的条件下成显著负相关；通过冗余分析，微生物群落结构应该与重金属浓度在显著性水平P＜0.05的条件下有显著关系，即通过蒙特卡罗检验。

4.根据权利要求1所述的一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，其特征在于，理想参考点的红树林应与待评价红树林位于同一区域，且植物种类、气候条件及水淹环境相同。

5.根据权利要求1所述的一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，其特征在于，所述红树林沉积物样品采集方法包括统一取样深度、取样点位设置、样品取样量和样品前处理；所述样品DNA提取方法包括选用成熟的DNA提取；所述PCR扩增方法包括用成熟的引物对dsrB功能基因进行PCR扩增，选用成熟的纯化试剂盒对PCR产物进行纯化；所述的克隆文库构建方法，选择克隆载体为Peasy-T1，转化所需的感受态细胞为Trans-T1，挑选阳性克隆子菌液进行一代测序技术测序，选取高质量的序列信息用于下游分析，所有的高质量序列在80％相似度水平上归类成OTU，OTU中具有最高丰度的序列选为该OTU的代表序列，基于OTU信息进行多样性和优势菌群分析。