[发明专利]一种基于G-四链体探针结构解旋的可视化识别microRNA的检测方法

权利要求书

1.一种检测microRNA的方法，包括如下步骤：合成探针；所述探针由结合区段和信号区段组成；所述结合区段为与目标microRNA的全长序列反向互补的DNA片段；所述信号区段为可形成G-四链体结构的DNA片段；

如果所述探针与待测样本进行DNA/RNA杂化反应后可以招募DNA聚合酶对探针的G-四链体结构进行解旋复制使其转变为双链结构，则待测样本中含有目标microRNA；反之，待测样本中不含有目标microRNA；

所述方法为非疾病诊断的方法。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述方法包括如下步骤：

(1)合成权利要求1中所述的探针；

(2)取步骤(1)所述探针，经过退火使所述探针的信号区段形成G-四链体结构；

(3)将步骤(2)的探针与待测样本进行DNA/RNA杂化反应；

(4)完成步骤(3)后，向反应体系中加入DNA聚合酶进行解旋扩增反应；

(5)完成步骤(4)后，向反应体系中加入血红素进行反应；血红素可与未解旋的G-四链体结构结合形成具有催化功能的复合物；

(6)完成步骤(5)后，向反应体系中加入ABTS和H₂O₂进行催化反应后检测420nm处吸收值；

所述方法设置空白对照；所述空白对照采用水替代待测样本；将待测样本在420nm处吸收值记为A，将空白对照在420nm处吸收值记为A₀；A₀-A的数值越大，待测样本中目标miRNA的含量越多。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

当选用的DNA聚合酶的复制方向是3′→5′时，所述探针自5’端至3’端依次为信号区段和结合区段；当选用的DNA聚合酶的复制方向是5′→3′时，所述探针自5’端至3’端依次为结合区段和信号区段。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述探针的信号区段的长度小于30bp；所述信号区段形成G-四链体结构时，四联体层数小于等于3。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述信号区段如序列表的序列1自5’端第1至19位所示。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述DNA聚合酶为Klenow Fragment聚合酶。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述步骤(3)中，所述探针在DNA/RNA杂化反应体系中的浓度为0.5-1μmol/L；

和/或，所述杂化反应温度为20℃-37℃；

和/或，所述杂化反应时间为60-120min；

所述步骤(4)中，所述DNA聚合酶在解旋扩增反应体系中的浓度为0.1-0.3unit/μL；

和/或，所述解旋扩增反应时间为40-60min；

所述步骤(5)中，所述血红素在反应体系中的浓度为2-4μmol/L；

和/或，所述反应时间为1-2h；

和/或，所述反应温度为20℃-37℃。

8.权利要求1至5中任一所述方法中的所述探针在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为检测目标microRNA。

9.一种检测microRNA的试剂盒，含有权利要求1至5中任一所述方法中的所述探针。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有记载权利要求1至7任一所述方法的说明书。