[发明专利]用于高危型HPV检测、分型的组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型的组合物，所述组合物包括下列引物和探针：

如SEQ ID NO:1所示的HPV 16型上游引物、如SEQ ID NO:2所示的HPV 16型下游引物和如SEQ ID NO:3所示的HPV 16型探针；

如SEQ ID NO:4所示的HPV 18型上游引物、如SEQ ID NO:5所示的HPV 18型下游引物和如SEQ ID NO:6所示的HPV 18型探针；

如SEQ ID NO:7所示的HPV 31型上游引物、如SEQ ID NO:8所示的HPV 31型下游引物和如SEQ ID NO:9所示的HPV 31型探针；

如SEQ ID NO:10所示的HPV 33型上游引物、如SEQ ID NO:11所示的HPV 33型下游引物和如SEQ ID NO:12所示的HPV 33型探针；

如SEQ ID NO:13所示的HPV 35型上游引物、如SEQ ID NO:14所示的HPV 35型下游引物和如SEQ ID NO:15所示的HPV 35型探针；

如SEQ ID NO:16所示的HPV 39型上游引物、如SEQ ID NO:17所示的HPV 39型下游引物和如SEQ ID NO:18所示的HPV 39型探针；

如SEQ ID NO:19所示的HPV 45型上游引物、如SEQ ID NO:20所示的HPV 45型下游引物和如SEQ ID NO:21所示的HPV 45型探针；

如SEQ ID NO:22所示的HPV 51型上游引物、如SEQ ID NO:23所示的HPV 51型下游引物和如SEQ ID NO:24所示的HPV 51型探针；

如SEQ ID NO:25所示的HPV 52型上游引物、如SEQ ID NO:26所示的HPV 52型下游引物和如SEQ ID NO:27所示的HPV 52型探针；

如SEQ ID NO:28所示的HPV 53、56、66型上游引物、如SEQ ID NO:29所示的HPV 53、56、66型下游引物和如SEQ ID NO:30所示的HPV 53、56、66型探针；

如SEQ ID NO:31所示的HPV 58型上游引物、如SEQ ID NO:32所示的HPV 58型下游引物和如SEQ ID NO:33所示的HPV 58型探针；

如SEQ ID NO:34所示的HPV 59型上游引物、如SEQ ID NO:35所示的HPV 59型下游引物和如SEQ ID NO:36所示的HPV 59型探针；

如SEQ ID NO:37所示的HPV 68型上游引物、如SEQ ID NO:38所示的HPV 68型下游引物和如SEQ ID NO:39所示的HPV 68型探针；

其中，各探针带有荧光报告基团，SEQ ID NO:3与6的荧光报告基团不相同，并且所述SEQ ID NO:3和6的荧光报告基团与其余探针的荧光报告基团也不相同；

其中，所述组合物还包括提取mRNA所需试剂、Mg²⁺、dNTPs、反转录酶、DNA聚合酶、PCR缓冲液，各成分终浓度为：Mg²⁺ 3~5mmol/L、dNTPs 3~5mmol/L、每组上下游引物0.05~0.2μmol/L、探针0.25~0.1μmol/L、反转录酶10~70μmol/L、DNA聚合酶0.5~2mmol/L。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述HPV 16型探针的荧光报告基团为CY5，所述HPV 18型探针的荧光报告基团为FAM，其余十三种HPV型的探针的荧光报告基团为ROX。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述组合物还包括：

由SEQ ID NO:40所示的内标上游引物，SEQ ID NO:41所示的内标下游引物和SEQ IDNO:42所示的内标探针。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中，内标探针带有荧光报告基团HEX或VIC。