[发明专利]一种脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种含脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用，通过了大量的实验摸索和验证，本发明选择第3‑10代的脐带间充质干细胞作为原材料，并通过先用机械法分散组织，再用含胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胰蛋白酶的混合酶短时间、多次数的处理方法，保证了分离的脐带间充质干细胞的活力。采用含DMEM/F12(无酚红)、10％FBS、20种氨基酸和8种维生素的脐带间充质干细胞制剂专用培养基，通过收集多次细胞培养上清液和细胞裂解物上清液的混合液，获得了更多的脐带间充质干细胞活性蛋白和活性因子，节省了制备成本，满足工业上对干细胞产品制剂需求。本发明制备的脐带间充质干细胞制剂能够促进表皮细胞和皮肤成纤维细胞增殖，安全无毒副作用，不过敏，应用于美容护肤产品效果显著。

技术领域

本发明涉及皮肤保养品技术领域，具体涉及一种含脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有自我更新、增殖、多向分化能力的一类干细胞，于1968年在骨髓中发现，能够诱导分化成心肌、神经、软骨、脂肪、肌腱等多种组织细胞。间充质干细胞可以从脂肪、骨髓、脐带、胎盘、羊膜等多种组织中分离，在临床上已经广泛应用到神经系统、心血管、骨科、糖尿病、肝脏、皮肤、胃肠道等多种领域。作为最早被发现的骨髓间充质干细胞，研究也最为广泛，但是成人骨髓间充质干细胞的数量、分化增殖能力受个体年龄、身体健康状态影响较大，且取样需要对骨髓进行穿刺，对身体伤害较大，操作过程也易受到污染。与骨髓间充质干细胞相比，来源于新生儿脐带的间充质干细胞属于医疗废物，取材方便，来源丰富，成本低，数量多且增殖分化能力强，分泌的有效因子也更多，能更好地应用于医疗和美容方面，是最理想的间充质细胞来源。

脐带间充质干细胞在培养的过程中，能够分泌大量有效活性成分，包括细胞生长因子SCF、bFGF、EGF、VEGF、KGF、IGF、HGF，免疫相关因子白细胞介素IL-6、IL-8、IL-10，I、II、III、IV型胶原蛋白，以及其他活性蛋白、小分子物质等，这些成分通过直接或间接地参与细胞信号转导、免疫调节过程，能够促进血管形成、促进细胞新陈代谢、加速伤口愈合，修复细胞损伤、促进胶原蛋白合成、缓解细胞衰老。在这些特点使得脐带间充质干细胞在医疗美容行业具有极大的发展潜力。如将上述活性物质作用于皮肤，可以促进表皮细胞和皮肤成纤维细胞增殖，增强皮肤防御能力、修复皮肤组织，解决日常皮肤问题如干燥、缺水、黑色素生成、衰老等。

目前在美容护肤行业中，脐带间充质干细胞可用来制备美容注射液或护肤品添加因子。美容注射液主要是将干细胞直接注射到皮肤中来缓解皮肤的营养缺失及老化，但是注射会形成伤口，有感染风险，且对注射环境和注射制剂的要求都比较高，成本昂贵，如申请号为CN201010551722的发明专利。而作为护肤品的添加剂，干细胞会直接作用于皮肤表层，不会对皮肤造成损伤，即使长期使用也没有副作用。制作成本相对于注射制剂要低很多。但是目前绝大多数制备干细胞制剂的方法得到的有效成分产量都较低，如申请号为CN201810621158的发明专利以脐带间充质干细胞的上清培养液作为精华素，然而众所周知高代次干细胞在培养过程中不仅会产生有益的细胞因子，也会产生细胞代谢废物，且该发明的细胞因子仅检测到含有IGF、bFGF和EGF，采用脐带间充质干细胞的上清培养液获得的细胞因子的种类和数量均有限，尚不能充分利用脐带间充质干细胞，也无法满足产业的实际需求。