[发明专利]一种脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种可促进皮肤修复与再生的脐带间充质干细胞制剂，包括脐带间充质干细胞提取物和脐带间充质干细胞制剂专用培养基，所述干细胞制剂专用培养基包括氨基酸混合液和维生素混合液；所述氨基酸混合液选自以下任一种或多种：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸；所述维生素混合液选自以下任一种或多种：维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B5、维生素B6、维生素C、维生素E、肌醇；所述脐带间充质干细胞为分离自健康、足月分娩的胎儿脐带后第3-10代的细胞。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞制剂，所述脐带间充质干细胞制剂专用培养基为以下(1)或(2)的培养基：

(1)所述脐带间充质干细胞制剂专用培养基添加有细胞因子的无血清培养基，所述细胞因子包括IGF、bFGF、EGF、PDGF、VEGF和HGF中一种或多种；

(2)所述脐带间充质干细胞制剂专用培养基为含DMEM/F12(无酚红)、10％FBS的有血清培养基。

3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞制剂，所述脐带间充质干细胞提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)脐带间充质干细胞的分离：采集健康、足月分娩的人胎儿脐带，加入脐带保存液(DMEM/F12+1％青链霉素)，分离出华通氏胶，剪碎后加入胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胰蛋白酶混合酶，37℃消化10min，轻柔震荡后将未消化组织取出再加入混合酶消化，反复多次，将消化得到的细胞收集种入培养瓶中，加入含DMEM/F12+10％FBS+1％P/S的培养基，37℃、5％CO₂培养；

(2)脐带间充质干细胞的传代及培养：弃去培养基，加入PBS润洗，再加入TrypLE消化液，37℃消化1min，用含DMEM/F12+10％FBS+1％P/S的培养基重悬细胞，贴壁后，将培养基更换为所述干细胞制剂专用培养基；

(3)脐带间充质干细胞提取物的制备：选择步骤(2)分离的第3-10代的脐带间充质干细胞，接种到培养瓶中，培养瓶加入10ml所述专用培养基，24h后收集培养基，存放于-4℃，再更换10ml新鲜的所述专用培养基，然后24h再次收集，直到培养瓶中的细胞融合率达到90％，将细胞消化并收集。用PBS悬浮，低温超声裂解，然后离心去除细胞碎片，收集包含细胞裂解物的上清，所有保存于-4℃上清及包含细胞裂解物的上清混合，即为脐带间充质干细胞提取物。

4.根据权利要求4所述的脐带间充质干细胞制剂，所述脐带间充质干细胞制剂还包括冻干保护剂，所述冻干保护剂为甘露醇、海藻糖、右旋糖酐的组合物。

5.根据权利要求1-5任一所述的脐带间充质干细胞制剂，所述脐带间充质干细胞制剂为粉剂、液体剂、乳剂、膏剂、霜剂、凝胶剂或冻干产品。