[发明专利]一种提高七稀甲萘醌产量的重组枯草芽孢杆菌及其应用有效

专利信息
申请号: 201910481658.1 申请日: 2019-06-04
公开(公告)号: CN110229772B 公开(公告)日: 2021-05-28
发明(设计)人: 夏洪志;刘龙;李江波;崔世修;吕雪芹;李江华;堵国成;陈坚;唐波 申请(专利权)人: 南通励成生物工程有限公司;江南大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12P7/66;C12R1/125
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 林娟
地址: 226000 江苏省*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 七稀甲萘醌 产量 重组 枯草 芽孢 杆菌 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种提高七稀甲萘醌产量的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168为出发菌株,利用P43启动子替换出发菌株染色体上甲基萘醌异分支酸合成酶基因menF和二羟基萘甲酸合成酶基因menB的天然启动子;利用Phbs启动子替换出发菌株染色体上O-琥珀酰苯甲酸-CoA连接酶基因menE、转酮酶基因tkt的天然启动子;用含有P43启动子的来源于E. coli K12的异分支酸合酶基因entC替换出发菌株染色体上的异分支酸基因、在出发菌株染色体上多糖脱乙酰酶C基因yjeAyjfA之间表达来源于E. coliK12的磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因ppsA,并敲除出发菌株染色体上的葡萄糖磷酸转运酶基因ptsG;所述P43启动子的序列如SEQ ID NO.3所示;所述Phbs启动子的序列如SEQ ID NO.5所示;所述异分支酸基因的序列如genebank ID:936582所示,所述多糖脱乙酰酶C基因yjeA的序列如genebank ID:936440所示,所述多糖脱乙酰酶C基因yjfA的序列如genebank ID:939830所示;

利用启动子Phbs在出发菌株染色体上应激蛋白基因ytxj和3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚磺酸盐7-磷酸合成酶基因aroA之间表达aroGfbr基因;所述aroGfbr基因的序列如SEQ ID NO.6所示;所述应激蛋白基因ytxj的序列如genebank ID:937308所示,所述3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚磺酸盐7-磷酸合成酶基因aroA的序列如genebank ID:937853所示;

利用P43启动子替换出发菌株染色体上莽草酸激酶基因aroK,所述莽草酸激酶基因aroK的序列如genebank ID:938343所示;

利用Phbs启动子替换出发菌株染色体上法尼基二磷酸合酶基因ispA的天然启动子,所述法尼基二磷酸合酶基因ispA的序列如genebank ID:938652所示;

利用P43启动子替换出发菌株染色体上七聚二烯丙基二磷酸合成酶基因hepS/T的天然启动子,所述七聚二烯丙基二磷酸合成酶基因hepS/T的序列genebank ID:938998所示;

Phbs启动子在出发菌株染色体上尿激酶基因yclG和芽孢萌发响应蛋白基因gerkA之间表达来源于运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)的2-脱氢-3-脱氧-磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因kdpG;所述尿激酶基因yclG的序列如genebank ID:938292所示,所述芽孢萌发响应蛋白基因gerkA的序列如genebank ID:938285所示,所述2-脱氢-3-脱氧-磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因kdpG的序列如genebank ID:33073472所示;

所述menF基因的序列如genebank ID:937190所示;所述menB基因的序列如genebankID:937195所示;所述menE基因的序列如genebank ID:937132所示;所述tkt基因的序列如genebank ID:937377所示;所述entC基因的序列如genebank ID:945511所示;所述ppsA基因的序列如genebank ID:946209所示;所述ptsG基因的序列如genebank ID:939255所示。

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