[发明专利]一种快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT-PCR引物组及检测方法

说明书

本发明涉及一种用于快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT‑PCR引物组，所述的多重RT‑PCR引物组是由用于检测CSFV的引物、用于检测GETV的引物和用于检测JEV的引物组成，该多重RT‑PCR引物组的序列如SEQ ID NO:1～6所示；所述的检测不以疾病诊断和/或治疗为目的。本发明还公开了快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT‑PCR方法，该方法实现在同一个反应体系中同时扩增三种病毒，减少了操作次数，极大的避免了交叉污染。该方法对动物源性食品、产品或有关样品中CSFV、GETV和JEV的检测与鉴别、公共卫生及流行病学调查等方面具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及了一种快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT-PCR引物组及检测方法。

背景技术

猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)是一种高度接触性、致死性的传染病，临床上发病猪表现为高热稽留、呼吸困难、便秘与腹泻交替、皮肤有点状出血，此外猪瘟病毒还可以导致妊娠母猪流产、死胎、弱仔等。日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus，JEV)和盖他病毒(Getah virus，GETV)都是以蚊虫为主要传播媒介的人兽共患病病毒。乙型脑炎在我国人群和猪群中的感染较常见，在我国分布较为广泛。上述三种病原均为RNA病毒，临床均可引起妊娠母猪的繁殖障碍和流产。随着目前养殖业的不断扩张，同区域的养殖场密度增加，各猪群之间或者各养殖场之间的交流更加频繁，尤其是一些依靠蚊虫等为媒介的病原，加重了该类疾病在不同猪群间的流行可能性。因此，当发生上述病原混合感染时，会极大的增加鉴别难度，而病原的确定常需要借助实验室进行。其中RT-PCR是实验室常用检测方法之一，其具有快速、灵敏、成本低、操作简单等优点；该方法不仅能进行快速确定病毒种类，还能检测病毒的早期感染和潜伏感染。但是检测时如果使用扩增单种病毒的引物对待测样品进行鉴别，则可能需要准备多份样品扩增多次才能确定感染的病毒类型，另外还会引起交叉感染。

发明内容

本发明为解决单一RT-PCR操作繁琐、交叉污染风险高的问题，提供一种快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT-PCR引物组及检测方法。

本发明提供如下技术方案：

本发明首先提供一种用于快速检测CSFV、GETV、JEV的多重RT-PCR引物组，所述的多重RT-PCR引物组是由用于检测CSFV的引物、用于检测GETV的引物和用于检测JEV的引物组成，其中，

用于检测CSFV的引物的核苷酸序列为：

上游引物C-F：5’-GTCAACCAATGAGATAGG-3’，如SEQ ID NO:1所示；

下游引物C-R：5’-GGCAGACAAGGTAGAAAG-3’，如SEQ ID NO:2所示；

用于检测GETV的引物的核苷酸序列为：

上游引物G-F：5’-TTCCGATGGCATGATAAA-3’，如SEQ ID NO:3所示；

下游引物G-R：5’-GGGACAAACGAGGAGGTG-3’，如SEQ ID NO:4所示；

用于检测JEV的引物的核苷酸序列为：

上游引物J-F：5’-ACTTGGGTGGACTTG-3’，如SEQ ID NO:5所示；

下游引物J-R：5’-GGAGCATTGGGTGTT-3’，如SEQ ID NO:6所示；

所述的检测不以疾病诊断和/或治疗为目的。

上述的多重RT-PCR引物组能够用于制备检测CSFV、GETV、JEV的试剂。