[发明专利]猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物及其联合检测方法

权利要求书

1.猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟RT-PCR检测的引物，其特征为，包括猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2和猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2；猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2包括引物P1和引物P2，猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2包括引物H1和引物H2；

引物P1的序列为：5’-ATGCTTTCACGGAGTTCTTGG-3’；

引物P2的序列为：5’-AGGGTTGACACCTTATGG-3’；

引物H1的序列为：5’-ACCGACGGATAACAGAATAG-3’；

引物H2的序列为：5’-GGTAAGATTGTGAAGGGATA-3’。

2.使用如权利要求1所述的引物进行猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，其特征为，包括以下步骤：

1)、猪繁殖呼吸障碍综合征检测引物对P1/P2和猪瘟病毒感染检测引物对H1/H2；

2)、制备临床病料样品；

3)、病料样品的RT-PCR扩增并检测；

4)、鉴定RT-PCR检测方法的特异性。

3.如权利要求2所述猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，其特征为，步骤2)中的临床病料样品的制备方法为Trizol提取法或应用试剂盒提取法。

4.如权利要求2或3所述猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，其特征为，步骤3)中的RT-PCR扩增方法为：按RT-PCR程序，检测不同的MgCl₂、引物、病毒DNA模板浓度；不同的融合温度，扩增循环次数的条件，建立联合RT-PCR的反应条件和程序。

5.如权利要求4所述猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，其特征为，步骤3)中的RT-PCR扩增病料的检测方法为：取PCR产物，在琼脂糖凝胶电泳，EB染色后紫外灯下观察。

6.如权利要求2、3或5猪繁殖呼吸障碍综合征和猪瘟的RT-PCR联合检测方法，其特征为，步骤4)中鉴定RT-PCR检测方法的特异性的步骤为：选取猪乙型脑炎病毒、猪5号病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒，以病毒核酸提纯试剂盒提取病毒RNA，同步进行RT-PCR扩增，鉴定检测方法的特异性。