[发明专利]基因工程化类球红细菌及其制备方法和法尼醇的生产方法

权利要求书

1.一种基因工程化类球红细菌的制备方法，其包括：

(1) 构建重组质粒并转化至供体菌得到阳性供体菌的步骤；

其中，步骤(1)包括：

使用第一引物对从类球红细菌的基因组中克隆psyL片段，和使用第二引物对从类球红细菌的基因组中克隆psyS片段；其中，所述第一引物对中各引物的序列分别如SEQ ID NO:1和2所示；所述第二引物对中各引物的序列分别如SEQ ID NO:3和4所示；

利用连接酶将所述psyL片段和psyS片段分别插入质粒pBBR1MCS2得到pBBR1MCS2-PSYi；和

将所述pBBR1MCS2-PSYi转化至供体菌，并筛选阳性供体菌；

(2) 使所述阳性供体菌与类球红细菌受体菌进行细菌接合 ，从而将所述重组质粒转移至所述类球红细菌的步骤；其中，类球红细菌受体菌为类球红细菌R. sphaeroides GY-2。

2.根据权利要求1所述的基因工程化类球红细菌的制备方法，其特征在于，步骤(2)包括：

将所述阳性供体菌和所述类球红细菌受体菌各自分别用培养基稀释重悬，将稀释重悬后的阳性供体菌和类球红细菌受体菌按比例混合，涂布到无抗固体平板进行预接合 ，之后收集并重悬细菌涂布到含K₂TeO₃和卡那霉素的抗性固体平板培养，挑取黑色接合 子，并进行菌落验证。

3.一种基因工程化类球红细菌，其特征在于，其通过权利要求1～2任一项所述的制备方法获得。

4.一种法尼醇的生产方法，其特征在于，包括培养根据权利要求3所述的基因工程化类球红细菌的步骤。

5.根据权利要求4所述的法尼醇的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1’）挑取活化后的基因工程化类球红细菌单菌落，以斜面的形式接种到含有固体培养基的试管斜面中，放入恒温培养箱中培养；和

（2’）使用接种环挑取试管斜面中的类球红细菌，转接至装有种子培养基的容器中，摇床培养，按照15～25体积%的接种量转接到发酵培养基中培养，得到发酵液；和

（3’）取所述发酵液离心，并经癸烷萃取后，即得法尼醇。

6.根据权利要求5所述的法尼醇的生产方法，其特征在于，所述发酵培养基中添加有癸烷。