[发明专利]用于甘蓝自交亲和性材料筛选的PCR引物、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201910401144.0 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110512018B | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 吕红豪;庄木;肖志亮;方智远;杨丽梅;张扬勇;王勇 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京百欧知识产权代理事务所(普通合伙) 11930 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 甘蓝 亲和性 材料 筛选 pcr 引物 试剂盒 及其 应用 | ||
1.用于筛选甘蓝(Brassica oleracea L.)自交亲和性材料的PCR引物，其核苷酸序列为：
上游引物BoS1F：5‘-AAACTTGTATCTGAAGAC-3’
下游引物BoS1R：5‘-TCTCGTTCTTGCTAGTCTTC-3’
所述PCR引物扩增的甘蓝自交亲和性材料特征条带大小为91bp，其核苷酸序列如SeqID No.3所示。
2.用于筛选甘蓝自交亲和性材料的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的PCR引物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包含用于进行PCR和/或电泳所需的试剂。
4.用于筛选甘蓝自交亲和性材料的方法，其特征在于，包括采用权利要求1所述的PCR引物和/或权利要求2或3所述的试剂盒进行如下步骤：
(1)采用所述PCR引物对待测甘蓝材料的基因组DNA进行PCR；
(2)凝胶电泳检测PCR产物；
(3)从电泳检测结果中筛选出与所述甘蓝自交亲和性材料特征条带大小一致的材料；
若BoS1F/R的PCR产物出现91bp的特征条带，则待测甘蓝材料具有自交亲和性特征；
若BoS1F/R的PCR产物出现80bp的特征条带，则待测甘蓝材料不具有自交亲和性特征。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，采用所述PCR引物对待测甘蓝材料的基因组DNA进行PCR的反应体系为：模板基因组DNA0.2μL/μL，包含Mg2+的10×PCR buffer缓冲液0.1μL/μL，dNTPs 0.2mM，Taq DNA聚合酶0.5U/μL，正向引物和反向引物0.4μM，其余为双蒸水。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸7min；4℃保存。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述凝胶电泳检测指采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，于160V恒功率电泳分离70分钟，最后银染显色。
8.权利要求2或3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，在标有甘蓝自交亲和性筛选用途的包装盒内装有权利要求1所述的PCR引物。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院蔬菜花卉研究所，未经中国农业科学院蔬菜花卉研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910401144.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
