[发明专利]一种化合物及其制备方法和作为荧光偏振探针在LXRβ配体筛选中的应用

说明书

本发明涉及一种化合物及其制备方法和作为荧光偏振探针在LXRβ配体筛选中的应用。所述化合物结构式如式(Ⅰ)所示：本发明提供的化合物具有荧光特性，对LXRβ有较好的特异性结合。将该化合物作为荧光偏振探针，通过竞争的方法，可以实现对LXRβ配体的筛选及配体亲和力水平的评价；基于本发明建立的筛选方法，本发明筛选获得了20个可以结合LXRβ的小分子量化合物，为后续的LXRβ靶向的药物设计提供了基础。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，更具体地，涉及一种化合物及其制备方法和作为荧光偏振探针在LXRβ配体筛选中的应用。

技术背景

肝X受体(LXR)属于核受体超家族，可以通过调控相关基因的转录，调节胆固醇和脂肪代谢、糖代谢以及抗炎等相关的生理过程。因此LXR也成为了核受体中重要的药物靶标。

LXR主要由DNA结合结构域、配体结合结构域组成，另外在其N端和C端分别有激活功能结构域1(AF1)和激活功能结构域2(AF2)。LXR最初被认为是孤儿受体，但是后来研究认为氧化甾醇类的化合物，例如24(S)-羟基胆固醇为其内源性的配体。LXR与一些核受体一样，能够与RXR形成异源二聚体发挥作用。LXR/RXR异源二聚体结合在DNA上相应靶基因的启动子区域，与LXR反应元件(LXRE)相结合。当LXR激动剂与LXR配体结合域结合后，可以招募共激活因子，从而促进下游靶基因的转录。

经过二十多年的研究，已有众多LXR激动剂被开发出来。典型的比如T091317，GW3965等。但是这些化合物均存在着升高甘油三酯的副作用。LXR由两个亚型组成，LXRα(NR1H3)和LXRβ(NR1H2)。二者在序列上有77％的同源度，但在体内的分布不同。LXRα主要在肝脏、小肠、肾、脾和脂肪组织等部位集中表达，而LXRβ在体内广泛分布。后来的研究证明这些副作用可能是由于LXRα引起的，所以后续的药物开发多集中在LXRβ选择性激动剂的开发上。另外，随着对LXR关注的增多，人们对于LXR的生理功能以及适应症有了更深入的了解。从最初针对动脉粥样硬化进行开发，到现在适应症的范围已经扩展到了糖尿病、阿尔兹海默症、特应性皮炎以及一些癌症。

LXR-623是由Wyeth开发的第一个进入临床试验的LXR激动剂，但是由于中枢神经系统的副作用以失败告终。Bristol-Myers Squibb公司开发的BMS-852927也由于升高甘油三酯等副作用导致临床试验失败。其他的药物研发快速推进，目前有两个药物在进行临床试验。用于治疗实体瘤和淋巴癌的RGX-104已进入临床I期，用于治疗特异性皮炎的ALX-101已进入临床II期。但是，寻找结构更加多样，疗效更显著的LXR激动剂仍然是学术界和工业界所关注的。

为了寻找新型的LXR激动剂，研究者们建立了一些筛选方法。例如在细胞水平上进行的报告基因实验。但是细胞水平的筛选实验存在着影响因素多，筛选周期长等缺点，难以实现化合物的快速大量筛选。在蛋白水平上的筛选方法包括荧光共振能量转移、均相时间分辨荧光、AlphaScreen等方法。但是这些方法都是基于LXR在结合配体之后能够招募共激活因子，从而检测LXR招募共激活因子能力的原理。而在蛋白水平上直接检测配体与LXR结合的方法主要为闪烁近邻法，通过待测配体竞争同位素标记的阳性化合物实现检测。虽然这种方法蛋白耗量少，但是同位素标记的化合物难以获得，难以实现筛选的目的。所以其他蛋白水平的筛选方法仍需建立。

荧光偏振是一种能够检测分子间相互作用的方法。通过荧光基团标记配体，进行竞争实验，即可实现待测化合物与受体结合能力的检测。其基本原理是，小分子在溶液中的转动速度比大分子快，因此不结合大分子的荧光化合物产生的偏振值较低；而当荧光化合物与大分子结合之后，转动变慢，从而产生较高的偏振值。因此，荧光偏振是一种可以在微孔板上实现检测，试剂用量少，可以实现高通量筛选的一种检测方法。

对于其他核受体来说，基于荧光偏振竞争的方法，已经开发出相应的检测方法甚至商品化试剂盒。但是暂未见利用荧光偏振方法测试化合物与LXR结合能力的详细报道。

发明内容