[发明专利]一种通过微生物发酵制备曲地酸的方法

说明书

本发明公开了一种通过微生物发酵制备曲地酸的方法。第一方面，本发明要求保护Pseudogymnoascus pannorum BJZ13在制备曲地酸中的应用。第二方面，本发明要求保护一种制备曲地酸的方法，包括如下步骤：发酵培养Pseudogymnoascus pannorum BJZ13，得到曲地酸。本发明公开了Pseudogymnoascus pannorum BJZ13的一种新用途，即发酵培养Pseudogymnoascus pannorum BJZ13，从发酵产物中分离纯化得到曲地酸。本发明提供的制备曲地酸的方法，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力。本发明为曲地酸类药物的资源开发提供了新途径。

技术领域

本发明属于生物化学领域，具体涉及一种通过微生物发酵制备曲地酸的方法。

背景技术

曲地酸是一类含二苯醚结构的化合物，具有抗菌、抗肿瘤等医药活性，以及杀菌、杀线虫及抑制水芹种子萌发等农药活性。利用微生物生产曲地酸，可以获得纯度较高的曲地酸单体，从而避免化学合成副产物的残留，并且微生物为活体为合成场所，利用生物自身的资源产生曲地酸，可以避免资源的浪费和对环境的破坏。微生物易于繁殖和大量培养，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力，是生产曲地酸药物的理想途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过微生物发酵制备曲地酸的方法。

第一方面，本发明要求保护Pseudogymnoascus pannorum BJZ13在制备曲地酸中的应用。Pseudogymnoascus pannorum BJZ13已于2018年03月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.15389。

第二方面，本发明要求保护一种制备曲地酸的方法，包括如下步骤：发酵培养Pseudogymnoascus pannorum BJZ13，得到曲地酸。

发酵培养具体包括如下步骤：

(1)将Pseudogymnoascus pannorum BJZ13的单菌落接种至种子培养基，15℃、120r/min振荡培养7天，得到种子液；

(2)将步骤(1)得到的种子液接种至装有发酵培养基的锥形瓶(4mL种子液/瓶)，15℃静置培养40天，得到发酵培养的产物。

种子培养基的制备方法：可溶性淀粉20g/L、FeCl₃ 0.00065g/L、MgSO₄ 0.5g/L、KH₂PO₄ 0.5g/L、(NH₄)₂SO₄ 0.65g/L，余量为水，调pH至7.2-7.4，然后121℃高压灭菌20min，冷却至室温时添加氨苄抗生素并使其浓度为1μL/mL。

发酵培养基的制备方法：取500mL锥形瓶，加入50g大米和80mL蒸馏水，121℃高压灭菌20min。

所述方法还包括对所述发酵培养的产物进行有机相提取的步骤。

所述有机相提取中采用的有机溶剂为乙酸乙酯和二氯甲烷。

所述有机相提取的方法包括如下步骤：取发酵培养的产物，采用乙酸乙酯进行提取，然后收集乙酸乙酯相进行减压浓缩，得到浸膏；然后取浸膏，采用二氯甲烷进行提取，然后收集二氯甲烷相进行减压浓缩，得到二氯甲烷相浸膏，又称粗提物。

所述有机相提取的方法包括如下步骤：

(1)取发酵培养的产物，加入乙酸乙酯，然后超声破碎，收集乙酸乙酯相；