[发明专利]一种与水稻稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记的应用

权利要求书

1.一种与水稻稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记的应用，其特征在于：所述分子标记由以下分子标记引物扩增得到：

InDel-19 正向：5’AAGGAGATCTGGTATGTGTGCG 3’；

InDel-19 反向：5’AGTTTGGGGTAGTGAAATGCGA 3’；

InDel-25 正向：5’CCTGGTCTAAAGCGCACCTA 3’；

InDel-25 反向：5’CGCCATGGATTCGTTCGACT 3’；

InDel-27 正向：5’TCGGTGCTTTAGATATGTTTTGCT 3’；

InDel-27 反向：5’ACAACTCAAACCAAGCTTCTCA 3’；

所述分子标记引物用于水稻稻瘟病抗性基因的鉴定，所述鉴定包括如下步骤：

a)以待鉴定水稻单株材料的DNA为模板；

b)用所述分子标记引物对步骤a）中的DNA进行PCR扩增获得扩增产物；

c)利用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶对步骤b）中的扩增产物进行凝胶电泳分离分析，通过核酸染料染色观察，出现不同分子量大小的带型；

d)若所述带型中存在由分子标记引物InDel-19、InDel-25和InDel-27分别扩增出的241bp、250bp和243 bp的特异性条带，则所述待鉴定水稻单株为含有稻瘟病抗性基因的植株。

2.如权利要求1所述的一种与水稻稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记的应用，其特征在于：步骤b）中，所述PCR扩增的反应体系按总体积10μL计，包括如下各组分：5.0μL PCRMasterMix、0.5μL 正向引物、0.5μL 反向引物、0.8μL DNA、3.2μL ddH₂O。

3.如权利要求1所述的一种与水稻稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记的应用，其特征在于：步骤b）中_，所述PCR扩增的反应条件为：94.0℃预变性5min；94.0℃变性30S，55℃复性30S，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min，4℃保存。