[发明专利]用于分枝杆菌菌种鉴定的寡核苷酸组合、方法及试剂盒

权利要求书

1.一种寡核苷酸组合，包括：

第一组：检测偶然分枝杆菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:5、6和19所示，以及检测胞内分枝杆菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:11、12、23和27所示；还包括选自以下组中的至少两组：

第二组：检测堪萨斯分枝杆菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:1、2和17所示，以及检测脓肿分枝脓肿亚种的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:7、8、21和25所示；

第三组：检测鸟分枝杆菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:3、4和18所示，以及检测结核分枝杆菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:9、10、22和26所示；以及

第四组：检测脓肿分枝马赛亚种的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:13、14、24和28所示。

2.根据权利要求1所述的寡核苷酸组合，其中，第四组还包括检测内标的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:15、16和20所示。

3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸组合，其中，所述寡核苷酸组合的荧光报告基团选自FAM、HEX、VIC、ROX、CY5、5-TAMRA、TET、CY3和JOE。

4.根据权利要求3所述的寡核苷酸组合，其中，所述寡核苷酸组合中的第一组的荧光报告基团为ROX、第二组为FAM、第三组为HEX或者VIC，以及第四组为CY5。

5.权利要求1-4中任一项所述的寡核苷酸组合在制备检测分枝杆菌的试剂盒中的用途。

6.一种试剂盒，包括如权利要求1-4中任一项所述的寡核苷酸组合。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，进一步包括提取DNA所需试剂、Mg²⁺、dNTPs、DNA聚合酶、PCR缓冲液中的至少一种。

8.一种用于以非诊断目的检测分枝杆菌的方法，包括以下步骤：

1）提取待测样品的DNA；

2）使用如权利要求1-4中任一项所述的寡核苷酸组合对步骤1）获得的DNA扩增；

3）分析结果。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述步骤3）中，采用Ct值作为堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌、偶然分枝杆菌和内标的判定标准；并且采用熔解曲线作为脓肿分枝脓肿亚种、结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和脓肿分枝马赛亚种的判定标准。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述步骤2）中的寡核苷酸组合的浓度由如下所示：

组份 浓度

SEQ ID NO:1-16 100-500nM

SEQ ID NO:17-20 50-250nM

SEQ ID NO:21-24 50-250nM

SEQ ID NO:25-28 50-250nM。