[发明专利]ROCK2在制备治疗逆转骨肉瘤细胞对TRAIL耐药药物中的应用

说明书

一种ROCK2在制备治疗逆转骨肉瘤细胞对TRAIL耐药药物中的应用。(1)首先采用荧光定量PCR、western blot及免疫组化分析骨肉瘤标本及癌旁组织中ROCK2的表达，然后分析其与预后的关系；(2)采用干扰技术，将阴性对照及干扰ROCK2的质粒分别导入骨肉瘤细胞U2‑OS及MG‑63，加入TRAIL，随后将阴性对照及上调ROCK2的慢病毒导入骨肉瘤细胞系U2‑OS，然后采用western blot、免疫荧光、CCK8、Edu、流式细胞术分析了骨肉瘤细胞中TRAIL的敏感性，通过以上实验，明确干扰ROCK2后抑制ROCK2激酶的活性能增强TRAIL的敏感性，从而为揭示新的治疗靶点，更有效的增强TRAIL的敏感性提供科学依据。具有逆转骨肉瘤细胞对TRAIL的耐药，为骨肉瘤治疗提供新的靶点，为更加有效地对抗TRAIL耐药提供科学依据的优点。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，具体涉及骨肉瘤细胞对TRAIL耐药影响因素研究技 术领域，具体的为一种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2在制备治疗逆转骨肉瘤细胞对 TRAIL耐药药物中的应用。

背景技术

骨肉瘤(osteosarcoma,OS)，系以能够直接成骨和产生骨基质的梭形基质细胞为特征的 骨原发性恶性肿瘤，好发于青少年，恶性程度高，易发生肺等器官转移，预后差，5年生存 率约为65％。由于OS的发生严重威胁着青少年的健康，尽管骨肉瘤化疗药物耐药机理的研 究已经进行了多年，但仍然没有取得重大突破，化疗耐药的骨肉瘤患者长期生存率仍然不到 20％。

临床上，骨肉瘤患者亟需传统手术+新辅助化疗之外的新的治疗手段。近年来，一种生物 治疗药物——肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-RelatedApoptosis Inducing Ligand，TRAIL)在实体恶性肿瘤的临床试验中取得了令人瞩目的研究成果，它是一 种能诱导癌细胞凋亡而对机体正常组织无明显损伤的内源性细胞因子，对肺癌、宫颈癌、淋 巴瘤等众多肿瘤都有明显疗效。但是，有研究发现骨肉瘤细胞对TRAIL具有耐药性,使TRAIL 在骨肉瘤中的临床应用大大受限，然而其机制尚不清楚。

研究证实Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coilforming protein kinase 2，ROCK2)在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用。ROCK2位于染色体2p24上， 包括33个外显子，可编码1338个氨基酸，ROCK2激酶结构域由氨基末端和羧基端组成， 并决定其催化活性。目前认为ROCK2是Rho/ROCK信号转导通路的关键信号分子，可以调 节细胞的收缩、粘附、迁移、增殖和凋亡。研究证实在许多不同肿瘤组织如肝癌、乳腺癌、 前列腺癌、肺癌等中均观察到ROCK2呈高表达，我们前期研究也证明ROCK2在肝癌、肾癌、结肠癌等组织中呈高表达；但是ROCK2在骨肉瘤组织中的表达，以及其对骨肉瘤细胞 对TRAIL耐药中的影响，目前还没有相关研究和报道。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，针对肿瘤治疗药物TRAIL在治疗过程中常产生耐药进 而导致化疗失败甚至疾病复发等现象，提供一种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2) 在制备治疗逆转骨肉瘤细胞对TRAIL耐药药物中的应用，进而逆转骨肉瘤细胞对TRAIL的 耐药，为骨肉瘤治疗提供新的靶点，为更加有效地对抗TRAIL耐药提供科学依据。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激 酶2(ROCK2)在制备治疗逆转骨肉瘤细胞对TRAIL耐药药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用了以下技术手段：

(1)首先采用荧光定量PCR、western blot及免疫组化分析骨肉瘤标本及癌旁组织中 ROCK2的表达，然后分析其与预后的关系；