[发明专利]一种检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒，所述试剂盒包括多重PCR引物，其序列分别如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4、SEQ ID NO.5～6所示。本发明通过合理的引物搭配，能排除大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌的干扰，实现鲍曼不动杆菌的特异性检测。本发明还具有很高的检测灵敏度，当样品中的鲍曼不动杆菌DNA浓度低至1pg/μL时，仍能检测到鲍曼不动杆菌。

技术领域

本发明涉及分子检测领域，尤其涉及一种检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒。

背景技术

不动杆菌属(Acinetobacter)为一群严格需氧型革兰氏阴性球杆菌，目前该菌属至少包含33个基因种，其中，最主要的感染菌种是鲍曼不动杆菌，约占72.9％。鲍曼不动杆菌广泛分布于自然界中，是引起多种院内感染的重要致病菌。其危险因素包括呼吸机依赖、机械通气、气管插管、侵入性操作、ICU环境、医务工作者手的交叉感染等。鲍曼不动杆菌患者死亡率高，预后差，可引起院内众多感染包括医院获得性肺炎尤其是呼吸机相关性肺炎，血液，泌尿道，伤口感染脑膜炎等，常有较高的死亡率和发病率。由于医院重症监护室里患者的免疫力与抵抗力低下，极易引发多重耐药鲍曼不动杆菌的感染与流行，甚至可能爆发院内感染，给临床治疗带来相当大的困难。

目前，大量的临床资料表明，快速准确确诊病原菌，给予合理而规范的抗生素治疗，对于节省治疗时间和确定最佳治疗方案是非常重要的。

传统的药敏性实验通常会耗费2、3天时间，会严重耽搁治疗的进程和效果。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括多重PCR引物，其序列分别如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4、SEQ IDNO.5～6所示。

如前所述检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒，它还包括Taq聚合酶、dNTP、MgCl₂、PCR缓冲液、去离子水。

如前所述的试剂盒，所述检测鲍曼不动杆菌的PCR试剂盒还包括鲍曼不动杆菌DNA阳性对照品。

本发明还提供了前述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

1)DNA提取；

2)PCR反应；

3)电泳检测PCR产物；

若步骤3)检测到3个条带，即判断为检测到鲍曼不动杆菌。

如前述的使用方法，所述PCR反应的条件为：在94℃下预变性5min后，进行一下扩增循环：在94℃下变性30s，在55℃下退火30s，在72℃延伸30s，反应30个循环，最后在72℃延伸5min。

如前述的使用方法，所述电泳是在1.5％的琼脂糖胶中进行的电泳。

如前述的使用方法，所述3个条带的大小分别为191、347、524bp。

本发明通过合理的引物搭配，能排除大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌的干扰，实现鲍曼不动杆菌的特异性检测。

本发明还具有很高的检测灵敏度。当样品中的鲍曼不动杆菌DNA浓度低至1pg/μL时，仍能检测到鲍曼不动杆菌。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过具体实施方式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明