[发明专利]一种辅助生殖培养用油的安全性检测方法在审
| 申请号： | 201910326425.4 | 申请日： | 2019-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN109971820A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 尹航;莫贝克;胡彦新;徐进;徐卫良 | 申请（专利权）人： | 东蕴医疗科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京递进知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11414 | 代理人： | 郭超栋;田丰 |
| 地址： | 201114 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 安全性检测 辅助生殖 动物血清蛋白 安全性控制 人血清蛋白 矿物油 常规培养 潜在毒性 细胞胚胎 细胞小鼠 小鼠胚胎 灵敏度 囊胚率 通用的 体外 微滴 胚胎 检测 | ||
1.一种辅助生殖培养用油的安全性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)促进雌性小鼠排卵，受精，受精成功后，从输卵管壶部取细胞团；
2)去除步骤1)细胞团中的颗粒细胞，收集1-细胞小鼠胚胎；
3)将步骤2)得到的1-细胞小鼠胚胎进行单胚胎的微液滴培养液培养，微液滴培养液中加入聚乙烯醇，分别覆盖待测用油和对照用油，培养后进行囊胚数量和囊胚率或囊胚扩展率的统计。
2.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，所述雌性小鼠选用5-7周龄小鼠。
3.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，受精操作包括腹腔注射妊娠母马血清诱导超排卵，48小时后人绒毛膜促性腺激素诱发排卵，雌鼠和雄鼠交配，交配成功验证。
4.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，去除步骤1)细胞团中的颗粒细胞优选透明质酸酶去除。
5.根据权利要求4所述的安全性检测方法，其特征在于，所述透明质酸酶浓度优选0.5-1.5mg/ml。
6.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，所述聚乙烯醇浓度为0.01mg/mL-0.03mg/mL。
7.根据权利要求6所述的安全性检测方法，其特征在于，所述聚乙烯醇浓度0.01mg/ml。
8.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，所述液滴培养液为不含血清蛋白培养液。
9.根据权利要求8所述的安全性检测方法，其特征在于，所述不含血清蛋白培养液选自Sigma-Aldrich提供的M16、KSOM或HTF胚胎培养液配方配制，去除其中血清蛋白成分。
10.根据权利要求1所述的安全性检测方法，其特征在于，所述步骤3)培养96小时的囊胚数量和囊胚率或144小时后的囊胚扩展率的统计。
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