[发明专利]一种用于荧光成像介导的光热肿瘤治疗的光热试剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于荧光成像介导的光热肿瘤治疗的光热试剂的制备方法，其特征在于，所述光热试剂为热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒，所述制备方法包括：

步骤a)称量二棕榈酰基卵磷脂、氢化大豆磷脂、高纯胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚菁绿，于氯仿和甲醇混合溶液中溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，并进一步干燥得到薄脂质膜；

步骤b)将步骤a)得到的薄脂质膜在含有碳点的硫酸铵溶液中水化，对水化溶液进行超声处理以形成均匀的悬浮液，将所述悬浮液通过脂质体挤出器挤出，使用凝胶层析柱除去游离的吲哚菁绿和碳点，获得中间液；

步骤c)向步骤b)获得的中间液中加入含有碳点的硫酸铵溶液在旋转蒸发仪里水化，水化结束后超声处理，使其充分分散，用脂质体挤出器将其挤出，将挤出后的脂质体溶液以磷酸盐缓冲液为透析液进行透析，获得热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a)中，二棕榈酰基卵磷脂、氢化大豆磷脂、高纯胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚菁绿的摩尔比为40～60：20～30：10～20：2～4：0.5～2，混合后总磷脂浓度为5～60mg/mL；所述氯仿和甲醇的体积比为3～5：1。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b)和所述步骤c)中，所述旋转蒸发温度、水化温度、超声处理温度均为50～60℃，所述水化时间均为1～4小时，所述超声处理时间均为3～8分钟。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b)中，所述碳点在硫酸铵溶液中的浓度为200～800μg/mL；所述步骤c)中，所述碳点在硫酸铵溶液中的浓度为1～4mg/mL。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b)和所述步骤c)中，所述脂质体挤出器为滤膜为100nm的聚碳酸酯滤器，所述挤出次数为20～60次。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b)中，所述凝胶层析柱为sephadex G-150柱；所述步骤c)中，所述透析为采用pH＝7.4的磷酸盐缓冲液作为透析液透析0.5～2天，脂质体挤出器挤出的脂质体溶液与磷酸盐缓冲液的体积比为1：150～300，透析液更换2～4次。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述中间液和热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒均需低温保存，保存温度为2～8℃。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：

步骤1)称量二棕榈酰基卵磷脂、氢化大豆磷脂、高纯胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚菁绿摩尔比为50:25:15:3:1，总磷脂浓度为10～40mg/mL，加入4mL的氯仿和1mL的甲醇混合溶液中溶解，在55℃下旋转蒸发除去有机溶剂，并进一步干燥得到薄脂质膜；

步骤2)将步骤1)得到的薄脂质膜在10ml含有浓度为500μg/mL碳点和200mM的硫酸铵溶液中于55℃水化2小时，在55℃下超声处理该水化溶液5分钟以形成均匀的悬浮液，并通过滤膜为100nm的聚碳酸酯滤器挤出60次，使用sephadex G-150柱除去除游离的吲哚菁绿和碳点，获得中间液，并于4℃保存；

步骤3)向步骤2)得到的中间液中加入5mL含有浓度为2mg/mL的碳点和200mM的硫酸铵溶液在旋转蒸发仪里水化1h，转速为100rpm，温度55～60℃；水化结束后超声3～5min，使其充分分散，并用滤膜为100nm的聚碳酸酯滤器将其挤压20次，将挤压后的脂质体溶液以pH＝7.4的磷酸盐缓冲液为透析液透析1天，脂质体溶液与磷酸盐缓冲液的体积比为1：200，透析液更换3次，获得热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒，并于4℃保存。

9.一种由权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒。

10.一种如权利要求9所述的热敏性脂质体-吲哚菁绿-碳点复合纳米颗粒在制备用于肿瘤治疗的药物中的应用。