[发明专利]基于RPA的鸡毒支原体的实时荧光检测试剂盒、试纸条检测试剂盒及其用途有效
| 申请号： | 201910307220.1 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN110004240B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 宫晓炜;郑福英;陈启伟 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/35 |
| 代理公司： | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人： | 郭卫芹 |
| 地址： | 730010 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 rpa 支原体 实时 荧光 检测 试剂盒 试纸 及其 用途 | ||
1.一种基于RPA的鸡毒支原体实时荧光检测试剂盒，其特征在于：所述实时荧光检测试剂盒包括下述的引物对和探针：
上游引物：5’-AGTGGGAAGATGGAAGCAGATCGTTCTAGTG-3’
下游引物：5’-GTAAATTAAATGAGATTTGCCCTTCACGATCGTC-3’
探针：5’-CTGATCTAGTAACTCAAGCAAG[dT-Fam]C[dSpacer]G[dT-BHQ1]GTGGTTATAGTC[C3-Spacer]-3’。
2.根据权利要求1所述的实时荧光检测试剂盒，其特征在于：所述上游引物、下游引物和探针在所述RPA试剂盒中的终浓度为10μM。
3.根据权利要求1所述的实时荧光检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的50μL反应体系如下：29.5μL水解缓冲液，10μM上下游引物各2μL，10μM探针0.5μL，去离子水9.5μL，模板或标准质粒4μL及2.5μL 280mmol/L的醋酸镁溶液。
4.权利要求1-3任一项所述的实时荧光检测试剂盒在制备检测鸡毒支原体的产品中的应用。
5.一种基于RPA的鸡毒支原体试纸条检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括侧流层析试纸条，还包括下述的引物对和探针：
上游引物：5’-AGTGGGAAGATGGAAGCAGATCGTTCTAGTG-3’
下游引物：5’-biotin-GTAAATTAAATGAGATTTGCCCTTCACGATCGTC-3’
探针：5’-FAM-GATCTAGTAACTCAAGCAAGC[dSpacer]GGTGGTTATAG[C3-Spacer]-3’。
6.根据权利要求5所述的基于RPA的鸡毒支原体试纸条检测试剂盒，其特征在于：所述上游引物、下游引物和探针在所述试剂盒中的终浓度为10μM。
7.根据权利要求6所述的基于RPA的鸡毒支原体试纸条检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的50μL反应体系如下：29.5μL水解缓冲液，10μM上下游引物各2μL，10μM探针0.5μL，去离子水9.5μL，模板或标准质粒4μL及2.5μL 280mmol/L的醋酸镁溶液。
8.权利要求5-7任一项所述的基于RPA的鸡毒支原体试纸条检测试剂盒在制备检测鸡毒支原体的产品中的应用。
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