[发明专利]一种对EB病毒LMP2A蛋白N端胞浆区特异性结合的多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种对EB病毒LMP2A蛋白N端胞浆区特异性结合的多肽及其应用，首次揭示了一种对EBV LMP2A蛋白N端胞浆区具有结合亲和力的多肽；本发明还提供了该多肽作为药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，本发明涉及一种对EB病毒LMP2A蛋白N端胞浆区特异性结合的多肽及其应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属于人类疱疹病毒，在人群中感染普遍。EB病毒不仅是传染性单核细胞增多症的病原，并与鼻咽癌(NPC)、口腔腺体肿瘤、淋巴瘤、何杰金氏病、胃癌以及器官移植后的B细胞淋巴瘤、艾滋病相关的淋巴瘤等密切相关。据统计全世界鼻咽癌(NPC)病例中约80％发生于我国，尤其我国南方为高发区，但至今尚无有效的疫苗和特异性的防治方法。研究提示，几乎100％未分化和低分化NPC患者均潜伏感染EB病毒，且在鼻咽癌组织中均能够检测到EB 病毒的基因组及其表达的相应蛋白。EB病毒潜伏感染时，主要表达六种核蛋白(EBNA)和潜伏膜蛋白(Latent membrane protein，LMP)1和2。LMP1为EB病毒恶性转化基因，可诱导B淋巴细胞转化；EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)共有497个氨基酸，是疏水性蛋白，由N端119个氨基酸、 C端28个氨基酸以及12个跨膜区组成，其N端和C端均位于胞浆内。LMP2A在EB病毒感染相关的疾病，如鼻咽癌中可检测到LMP2A的持续表达，其位于胞浆区的N端结构域中含大量酪氨酸残基，第74位和85位包含YXXL序列，形成免疫受体介导的活化基序ITAM，参与与信号转导通路中磷酸化蛋白的上调，与细胞信号的转导有关，通过一定的信号通路途径使感染病毒的淋巴细胞逃避机体免疫监视维持病毒的潜伏感染；此外N端含有两个富含脯氨酸的结构域(PPPPY)以及位于第101和 112位的PY结构域，与结合细胞E3泛素连接酶有关，募集的连接酶对于Lyn，Syk激酶及组织B细胞受体的信号激活均有重要作用，对维持EB病毒的潜伏感染程度，对感染细胞的信号通路和细胞增殖发挥着重要的影响。LMP2A是EB病毒感染的B细胞或某些上皮细胞潜伏感染过程中表达的病毒蛋白，持续并稳定地在EB病毒相关肿瘤组织中呈高表达，通过其胞浆区的结构域影响或调控细胞的信号通路，从而诱导细胞的增殖、浸润和永生化。因此，LMP2A是EB病毒相关肿瘤预防和治疗研究的理想靶抗原之一。

靶向治疗是目前肿瘤治疗中最具希望的方法和策略。以表皮生长因子受体(EGFR)和肿瘤血管生成为靶点进行治疗，如EGFR单克隆抗体(HER2单抗)、小分子化合物酪氨酸激酶拮抗剂(赫赛汀和西妥昔单抗等)、贝伐单抗及舒尼替尼等，通过特异性阻断肿瘤细胞的信号传导或是通过封闭受体阻止肿瘤血管生成，从而抑制肿瘤细胞生长或促使肿瘤细胞凋亡。但基于抗体分子的靶向治疗仍然存在其应用的局限性，如渗透性差、成本昂贵、具有较强的免疫原性和毒副反应严重等有待进一步研究改善。尤其毒副作用产生的毒性效应已经成为发展针对肿瘤治疗性抗体的主要障碍，产生肝、肾及神经系统毒性而使其功能降低。用同位素标记抗体进行放射性免疫治疗也会导致骨髓抑制等。

基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗EB病毒感染及其相关肿瘤的新药物或新方法，以改善目前临床现状。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对EB病毒LMP2A蛋白N端胞浆区(LMP2A-N)特异性结合的多肽及其用途。

本发明的第一方面，一种对EB病毒LMP2具有结合亲和力的多肽，多肽是以如SEQID NO:1所示的葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列作为骨架，进行12-20个氨基酸变异后获得的多肽。

在另一优选例中，对EB病毒LMP2蛋白具有结合亲和力的多肽在如SEQ ID NO:1所示的葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列的第9-11，13-14，17-18，24-25，27-28，32，35，43位上发生氨基酸突变。