[发明专利]一种同时检测5个磺胺类耐药基因的多重液相基因芯片引物、试剂盒及其分析方法

说明书

本发明公开了一种同时检测5个磺胺类耐药基因的多重液相基因芯片引物、试剂盒及其分析方法，旨在提供一种操作简单，能够同时检测磺胺类耐药基因int1，sul1，sul2，sul3和sul4而且具有灵敏度高，准确率高，可实现同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测引物、试剂盒及其分析方法；其技术方案包括引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：10所示的引物；本发明属于细菌耐药性检测领域。

技术领域

本发明属于实验动物的病原检测领域，具体涉及一种同时检测磺胺类耐药基因int1，sul1，sul2，sul3和sul4的多重液相基因芯片分析方法及试剂盒。

背景技术

沙门氏菌、大肠杆菌等革兰氏阴性菌是重要的致病菌，由于抗生素大规模不合理的使用，使得这些致病菌出现了严重的多重耐药性，导致大部分现有药物无效。由质粒介导的耐药基因可传递给其他动物和人类，在给养殖业造成了严重经济损失的同时，也影响着食品安全和人类健康。

Ⅰ类整合子(int1)作为可移动的DNA片段，能够捕获外源耐药基因并将耐药基因水平传播，对细菌的耐药性传播有非常重要的意义。致病菌对磺胺类广泛耐药与磺胺类耐药相关基因sul1、sul2、sul3和sul4基因有关。sul1基因常与其他耐药基因整合到Ⅰ类整合子上，sul2基因常位于非接合性质粒或可移动多重耐药质粒上，sul3和sul4是新近发现的磺胺类耐药相关基因。传统的表型检测采用药敏试验方法及自动化药敏检测方法，该方法以细菌培养为基础，能直观反应病原菌对某种药物敏感或耐药，但药敏结果报告较慢，经验依赖性强，操作繁琐，不能完全适应临床治疗的需要。

现有的磺胺类耐药基因检测主要靠普通单重PCR和多重PCR。已报道的针对大肠杆菌和沙门氏菌的多重PCR(int1、sul1、sul2、sul3)检测耐药基因，产物片段大小从/285bp到898bp不等，没有对多重PCR的灵敏度做探讨，存在较高的漏检风险。而且，无论是单重还是多重PCR技术，其结果判定都需要凝胶电泳，费时费力，在实际应用中遇到样品量大的情况，很难满足检测需求。

另外，随着磺胺类耐药基因sul4的发现，目前国内还未见到一种能同时检测5种磺胺类耐药基因的检测方法，也未见有应用多重免疫荧光分析方法检测磺胺类耐药基因的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高，准确性好，同时检测磺胺类耐药基因int1，sul1，sul2，sul3和sul4的多重液相基因芯片分析引物对。

为此，本发明提供的第一个技术方案为：

一种同时检测5个磺胺类耐药基因的多重液相基因芯片引物，所述的5个磺胺类耐药基因分别为：int1，sul1，sul2，sul3和sul4；其中：

int1检测引物对：P1核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，P2核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

sul1检测引物对：P3核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，P4核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

sul2检测引物对：P5核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，P核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

sul3检测引物对：P7核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；P8核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示；

sul4检测引物对：P9核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示；P10核苷酸序列如SEQ IDNO：10所示。

优选的，上述的同时检测5个磺胺类耐药基因的多重液相基因芯片引物，

所述引物P1和P2其中一条引物的5’端被生物素化；

所述引物P3和P4其中一条引物的5’端被生物素化；