[发明专利]用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物、试剂盒及检测方法。所述用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物序列如SEQ ID NO:1‑2所示。本发明利用特异性引物将C1QTNF3基因的219bp缺失可变剪接体从该基因的多种剪接形式中分离出来，对C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的表达水平进行定量分析，准确、快速、方便，具有很强的实用性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

C1QTNF3(CORS26)又称CTRP3或cartducin，是2003年发现的脂肪因子。C1QTNF3的生理功能是可调节软骨细胞增殖及骨关节疾病；调节内分泌、糖脂代谢、线粒体生物合成、免疫、炎症反应、细胞凋亡、血管新生、血管钙化以及心室重塑等多种生理、病理过程；调节机体睾酮、脂肪因子的分泌。猪C1QTNF3基因在组织中广泛表达，但其多种可变剪接体的鉴别和分离进展相对缓慢，这在一定程度上阻碍了C1QTNF3基因生理功能的研究。因此利用分子生物学手段鉴别某一剪接体组织表达模式，进而对其生物学功能的阐明具有推动作用，意义重大。

C1QTNF3属于分泌蛋白家族，可分为4个结构域：N-末端信号肽、可变域、胶原重复序列及C-末端gC1q球型域。人和小鼠C1QTNF3的N-末端含疏水性的信号肽，无跨膜结构域，可能是非膜蛋白。C1QTNF3在人体细胞中主要以二聚体和多聚体形式存在，但与脂联素和其他家族成员之间不能形成异源二聚体或多聚体。

可变剪接体是影响蛋白质发挥功能的重要原因之一。目前在人类中已经发现两种C1QTNF3剪接异构体(C1QTNF3 transcript variant 1，C1QTNF3 transcript variant 2)。然而，在猪中仅发现一种C1QTNF3剪接异构体，而且检测繁琐、耗时长、准确率低，因此亟需开发新的检测技术手段，为深入探究剪接体的生物学功能奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物、试剂盒及检测方法。

发明人在对猪C1QTNF3基因克隆和功能研究的过程中发现该基因第1外显子缺失了219bp的片段，这种缺失符合GT-AG剪接模式，据此提供一种检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物以及包含该引物的试剂盒及检测方法，可有效解决现有的检测方法程序繁琐、耗时长、准确率低的问题。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供用于检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的引物，包括引物CX2-F和CX2-R，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1-2所示。

第二方面，本发明提供含有所述引物CX2-F和CX2-R的试剂盒。

进一步地，所述试剂盒还包括用于扩增18S内参基因的引物18S-F和18S-R，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3-4所示。

第三方面，本发明提供所述引物CX2-F和CX2-R、或含有上述引物的试剂盒在检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体中的应用。

第四方面，本发明提供一种检测C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体的方法，包括以下步骤：

1)提取待测样本总RNA，反转录成cDNA；

2)以步骤1)的cDNA为模板，利用引物18S-F和18S-R qPCR扩增18S内参基因，同时利用引物CX2-F和CX2-R qPCR扩增C1QTNF3基因219bp缺失可变剪接体；