[发明专利]一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法

说明书

本发明涉及一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法。应用该检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对脂蛋白磷脂酶A2含量的自动化测定，可以高通量、快速化、精确地测定生物样本中脂蛋白磷脂酶A2的含量，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，有效降低脂蛋白磷脂酶A2检测成本，有利于临床广泛推广使用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法。

背景技术

脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）是一项用于动脉粥样硬化、冠心病的临床评价和风险预测的重要评价指标。脂蛋白磷脂酶A2是一种非钙依赖性的丝氨酸脂酶，与cPLA2和sPLA2等磷脂酶不同的是，脂蛋白磷脂酶A2与低密度脂蛋白相关，与高密度脂蛋白相关性微弱。脂蛋白磷脂酶A2由巨噬细胞和其他炎症细胞产生，在动脉粥样硬化的病变晚期比前期浓度高。低密度脂蛋白氧化是动脉粥样硬化的过程中的一个关键步骤。脂蛋白磷脂酶A2通过水解过氧化物酶参与被氧化的低密度脂蛋白在血管壁中的降解，生成有效的促炎介质：溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸，导致动脉粥样硬化斑块的形成。脂蛋白磷脂酶A2与其他的心血管脂质标志物一样存在一定的个体差异，但与高敏C反应蛋白相比可变性大大减少。除此之外，脂蛋白磷脂酶A2在系统性炎症条件下不会升高，因此可能作为血管炎症反应的特异性标志物。由于脂蛋白磷脂酶A2在个体之间相对小的生物差异性和血管特异性的特点，因此脂蛋白磷脂酶A2的检测在心血管风险的监控中有重要意义。

目前国内外关于脂蛋白磷脂酶A2的检测已申请及获得授权的专利较多，所使用的检测方法基本都是免疫学方法，如胶乳增强免疫比浊、ELISA、免疫荧光、化学发光、磁微粒化学发光、时间分辨荧光免疫分析、免疫胶体金、免疫层析等。这些免疫学方法所使用的检测试剂灵敏度低、特异性弱，配制过程复杂，尤其是检测结果以底物转换速度：nm/min/ml计算，换算复杂，难以满足行业发展需要。因此，研发一种灵敏度高、结果精确，且高通量、快速化，操作简便、成本低廉的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法对相关疾病的临床诊断具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：针对现有技术的上述缺陷，提供一种操作简便、灵敏度高、特异性强的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法。应用该检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对脂蛋白磷脂酶A2含量的自动化测定，可以高通量、快速化、精确地测定生物样本中脂蛋白磷脂酶A2的含量，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，有效降低脂蛋白磷脂酶A2检测成本，有利于临床广泛推广使用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体和均相酶底物溶液；所述试剂R2包含脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物和R2缓冲液。

本发明所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，制备方法包括以下步骤：

A.试剂R1的制备：将质量分数5.0%的氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5.0%的葡萄糖-6-磷酸、0.1%的牛血清白蛋白、0.05%的NaN₃的用55 mmol/L、pH=8.0的Tris缓冲液溶解制成均相酶底物溶液；再将抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体加入所述均相酶底物溶液中混匀，得到试剂R1，所述抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:100～1:10000；优选地，所述抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:300。

B.试剂R2的制备：将质量分数0.1%的牛血清白蛋白、0.05%的NaN₃用120 mmol/L、pH=8.2的Tris缓冲液溶解制成R2缓冲液，再将脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物加入所述R2缓冲液中混匀，得到试剂R2，所述脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:100～1:10000；优选地，所述脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:900。