[发明专利]一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体和均相酶底物溶液；所述试剂R2包含脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物和R2缓冲液；

所述的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体，由脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽免疫原免疫实验动物后产生，所述抗体为完整抗体分子，或者为保留与脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽特异性结合能力的抗体片段或抗体衍生物；所述实验动物为兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种；

所述脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽免疫原由脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽衍生物与载体连接而成，其结构式如下述式(Ⅰ)所示：

所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽，选自血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的一种；

所述的脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物由脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶连接而成，其结构式如下述式(Ⅱ)所示：

所述的脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽衍生物，其结构式如下述式(Ⅲ)所示：

2.根据权利要求1所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，所述实验动物为兔。

3.根据权利要求1所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，所述载体为血清蛋白。

4.根据权利要求3所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，所述载体为牛血清白蛋白。

5.根据权利要求1所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤：

A.试剂R1的制备：将质量分数5.0％的氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5.0％的葡萄糖-6-磷酸、0.1％的牛血清白蛋白、0.05％的NaN₃用55mmol/L、pH＝8.0的Tris缓冲液溶解制成均相酶底物溶液；再将抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体加入所述均相酶底物溶液中混匀，得到试剂R1，所述抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:100～1:10000；

B.试剂R2的制备：将质量分数0.1％的牛血清白蛋白、0.05％的NaN₃用120mmol/L、pH＝8.2的Tris缓冲液溶解制成R2缓冲液，再将脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物加入所述R2缓冲液中混匀，得到试剂R2，所述脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:100～1:10000。

6.根据权利要求5所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，所述抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:300；所述脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:900。

7.根据权利要求1所述的脂蛋白磷脂酶A2检测试剂，其特征在于，所述抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的制备方法，包括以下步骤：

a.用PBS缓冲液将脂蛋白磷脂酶A2氨基末端三肽免疫原稀释至3.0mg/ml，得到免疫原溶液，然后用3.0ml所述免疫原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；

b.2周后，再用3.0ml相同的免疫原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔2～5周注射一次，共计注射3～8次；

c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化得到抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体。