[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于电化学适配体传感器检测黄曲霉毒素B1的方法，所述传感器包含有工作电极、参比电极和对电极，所述工作电极为玻碳电极，参比电极为饱和氯化钾甘汞电极，对电极为铂柱电极，其特征在于：所述方法包括：

1)对工作电极修饰介孔碳：取适量介孔碳溶解在N，N-二甲基甲酰胺水溶液中，超声得到均匀分散的介孔碳悬浮液，将介孔碳修饰在工作电极表面来增大工作电极的表面积；具体方法为：取1 mg 介孔碳溶解在2 ml N，N-二甲基甲酰胺水溶液中，超声30 min得到均匀分散的浓度为0.5 mg /mL的介孔碳悬浮液，取介孔碳悬浮液2-14μL滴加到预处理好的洁净工作电极上，自然晾干，得到介孔碳修饰的CMK/GCE工作电极；所述N，N-二甲基甲酰胺水溶液是用N，N-二甲基甲酰胺和水按照体积比1:1配制而成；

2)金纳米粒子的修饰：将步骤1）修饰好的工作电极浸入HAuCl₄和H₂SO₄混合溶液中恒电位沉积，以改变工作电极的表面性能；具体方法为：将获得的CMK/GCE工作电极浸没于5 mLHAuCl₄和H₂SO₄的混合溶液中，铂柱电极作为对电极，饱和氯化钾甘汞电极作为参比电极，采用恒电位技术进行金纳米粒子的恒电位沉积，设定恒定电位为 -0.2 V，采样间隔为0.5 s，沉积结束后取出工作电极用超纯水仔细冲洗，氮气吹干，在介孔碳修饰的基础上得到金纳米粒子修饰的AuNPs/CMK/GCE工作电极；

3)连接AFB1适配体：将一端修饰有巯基的AFB1适配体作为识别原件滴加于步骤2）修饰好的工作电极上； 具体方法为：5’端修饰有巯基的AFB1适配体用TE缓冲溶液配制成适配体稀释液，所配适配体稀释液pH值为8.0；取10μL 适配体稀释液滴加在AuNPs/CMK/GCE工作电极表面并孵育过夜，取10μL巯基己醇 MCH滴加在工作电极表面孵育，以封闭工作电极表面未与适配体连接的金纳米粒子的空余位点，得到Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极；

4)亚甲基蓝的引入：步骤3）得到的连接AFB1适配体的工作电极浸入亚甲基蓝溶液中，亚甲基蓝吸附于适配体链上；具体方法为：将Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极浸泡在MB溶液中10min，使MB通过静电作用和嵌入作用连接到适配体上，取出工作电极后用PBS 仔细冲洗以去除未嵌入的MB，得到MB-Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极，氮气吹干备用；

5）检测还原峰电流值：AFB1与工作电极上适配体的结合，将不同浓度的AFB1滴加在步骤4）修饰好的工作电极；差分脉冲伏安法检测，经孵育后在磷酸盐缓冲液中用差分脉冲伏安法测定还原峰电流值，根据产生电流情况来分析与AFB1浓度之间的关系；具体步骤为：（1）AFB1与工作电极上适配体的结合：取10μL 不同浓度的AFB1标准液滴加在MB-Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极上，孵育后用PBS仔细冲洗以去除工作电极表面未结合的AFB1，用氮气吹干，形成待检测工作电极；

（2）差分脉冲伏安法检测：待检测工作电极浸入pH为7.4的PBS中，以饱和氯化钾甘汞电极为参比电极，以铂柱电极为对电极，在一定的电位范围下进行差分脉冲伏安法扫描。

2.根据权利要求1所述一种基于电化学适配体传感器检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于：所述HAuCl₄和H₂SO₄的混合溶液中，HAuCl₄浓度为2.5 mmol/L， H₂SO₄浓度为0.5mol/L。