[发明专利]结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的表达纯化、晶体结构及应用有效
| 申请号: | 201910223870.8 | 申请日: | 2019-03-22 |
| 公开(公告)号: | CN110256540B | 公开(公告)日: | 2022-10-11 |
| 发明(设计)人: | 李继喜;李正阳;战博闻;高宝才 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
| 主分类号: | C07K14/35 | 分类号: | C07K14/35;C07K1/30;C12N15/70 |
| 代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陆飞;陆尤 |
| 地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 结核 分枝杆菌 核糖体 蛋白 s7 表达 纯化 晶体结构 应用 | ||
1.一种结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的晶体,其特征在于,该核糖体蛋白S7的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,含有156个氨基酸,分子量为17.6 kDa;所述晶体三维结构具有表1中所列的原子坐标;
其分辨率为1.80Å;所述核糖体蛋白S7的晶体结构空间群为P212121,一个不对称单位含有两个分子;晶胞参数为:a=54.712 Å, b=58.428 Å, c=126.025 Å,α=β=γ=90 °。
2.根据权利要求1所述的核糖体蛋白S7的晶体,其特征在于,该结构分为两部分,一部分为由α螺旋1、α螺旋2、α螺旋3、α螺旋4和α螺旋5组成的α螺旋束结构,另一部分包括由β折叠1和β折叠2组成的β发卡结构以及α螺旋6;其中,α螺旋1,即含Gln21-Val30的氨基酸区段;α螺旋2,即含Lys36-Thr54的氨基酸区段;α螺旋3,即含Pro58-Val69的氨基酸区段;β折叠1,即含Leu73-Val80的氨基酸区段;β折叠2,即含Ala83-Glu90的氨基酸区段;α螺旋4,即含Pro93-Gln110的氨基酸区段;α螺旋5,即含Met116-Asn129的氨基酸区段;α螺旋6,即含Ala133-Asn148的氨基酸区段。
3. 一种如权利要求1所述结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的晶体的结晶方法,其特征在于,具体步骤为,将目的蛋白S7浓缩至浓度为5-20mg/ml,使用结晶试剂盒作为晶体生长的初筛条件,采用悬滴气相扩散法进行结晶,结晶液滴中蛋白溶液与结晶试剂体积比在2:1至1:2的范围内,蛋白溶液中蛋白质浓度为5-20mg/ml,结晶条件为5-25% PEG 3350,5-15%Tacsimate,pH 5.0-7.0;温度为4-25摄氏度。
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