[发明专利]一种C反应蛋白的浓度检测方法

权利要求书

1.一种C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、搭建具有三明治结构的金纳米颗粒-核酸适配体-磁球生物传感器；

S2、将待测C反应蛋白投入到含有所述生物传感器的缓冲液中进行反应，以使C反应蛋白将所述生物传感器上的金纳米颗粒置换到缓冲液中；

S3、反应结束后，提取缓冲液中的金纳米颗粒在暗场显微镜下观察并计数；

S4、根据预先得到的C反应蛋白浓度与金纳米颗粒数量的对应关系，得到待测C反应蛋白的浓度；

其中，所述对应关系通过如下方式得到：利用多组已知浓度的C反应蛋白样品分别与所述生物传感器形成多个实验组进行反应后，对每组分别执行步骤S3，并采用数值拟合方法对C反应蛋白样品的浓度与对应的置换下来的金纳米颗粒数量进行曲线拟合，得到所述对应关系。

2.如权利要求1所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，步骤S1具体包括：

S11、用DNA修饰金纳米颗粒：让修饰有巯基的c-DNA与金纳米颗粒通过金巯键的相互作用连接；

S12、用DNA修饰磁球：让核酸适配体与磁球通过生物素与亲和素的非共价相互作用连接；其中，所述核酸适配体是修饰有生物素的C反应蛋白核酸适配体，所述磁球是修饰有链霉亲和素的磁球；

S13、将经过步骤S11和S12修饰后的金纳米颗粒和磁球通过碱基互补配对作用连接，形成所述具有三明治结构的金纳米颗粒-核酸适配体-磁球生物传感器。

3.如权利要求2所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，步骤S12中所述C反应蛋白核酸适配体为5'-CGAAGG GGA TTC GAG GGG TGA TTG CGT GCT CCATTT GGT G-3'，相匹配的所述c-DNA为5'-TTT TTT TTC ACC AA-3'。

4.如权利要求1所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，所述缓冲液包括10mMPBS、0.3M NaCl以及0.01wt％SDS。

5.如权利要求1所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，步骤S3具体包括：

反应结束后，提取游离于所述缓冲液中的金纳米颗粒并置于载玻片上进行固定，在暗场显微镜下利用彩色CCD拍照获得暗场图像，从所述暗场图像上对金纳米颗粒进行计数，以统计被待测C反应蛋白置换出的金纳米颗粒数量。

6.如权利要求5所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，步骤S3中采用磁分离液相技术提取金纳米颗粒以进行所述计数。

7.如权利要求5所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，在MATLAB中利用所述暗场图像对金纳米颗粒进行计数。

8.如权利要求1所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，还包括采用若干组浓度已知的C反应蛋白作为验证组，来验证所述对应关系的准确性；所述验证组的C反应蛋白的浓度与所述多个实验组的C反应蛋白样品浓度不同。

9.如权利要求1至8任一项所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，所述金纳米颗粒包括金纳米球和金纳米棒。

10.如权利要求9所述的C反应蛋白的浓度检测方法，其特征在于，所述金纳米颗粒是尺寸35～75nm的金纳米球，其在暗场显微镜下呈绿色。