[发明专利]凝结芽孢杆菌产细菌素TK1、其制备方法及应用

说明书

本发明提供一种凝结芽孢杆菌TK1产细菌素、其制备方法及应用，所述细菌素具备良好的抑菌作用和炎性调节作用。所述凝结芽孢杆菌TK1产细菌素分子量为11207Da。所述细菌素的N‑末端序列为GGAGMNPIDYDR(如序列表中SEQ ID NO.1所示)。所述细菌素可用于制备治疗炎性疾病和/或调节炎性的药物以及抑菌药物。本发明制备、纯化了凝结芽孢杆菌产细菌素，所述细菌素与其他报道的蛋白质序列没有同源性，且具有良好的抑菌作用。(2)将所述细菌素用于大肠杆菌刺激的肠上皮细胞，可对炎性作用进行调节。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种凝结芽孢杆菌TK1产细菌素、其制备方法及应用。

背景技术

当机体出现炎症反应时，通常需要使用抗炎消炎药物。炎症是一个病理过程，典型特征是红、肿、热、痛和功能障碍。感染和非感染都能造成炎症反应。一般用抗生素和消炎药物等药物来达到抗炎目的。抗炎是非甾体类药物在对抗体内无菌性的变态类炎症，通过调节炎症因子的分泌，使炎症得以减轻至消退。目前畜牧业生产中普遍使用的抗炎消炎药物仍为抗生素。而在畜牧业生产中长期大量地滥用抗生素已造成了严重的危害：由于抗生素在体内的残留的残留，加速了大量耐药菌株的产生，导致动物机体免疫力下降，诱发各种疫病的发生与流行细菌不断的代谢。

细菌素是细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽。细菌素不仅对许多致病菌具有很强的抑制作用，而且对已经产生耐药性的细菌仍能有抑杀效果，而且，细菌素能溶于多种蛋白酶，在体内基本上可以被完全分解，不会残留，不会导致耐药菌株的产生。另外，细菌素结构稳定，在高温，酸性等极端环境下也能生存，因此细菌素在动物疾病防治中潜力巨大。由于抗炎消炎作用与抑菌杀菌作用存在本质上的区别：抗炎消炎药物作用于致炎因子，而抑菌抗菌药作用于病原微生物，目前所发现的细菌素仅有抑菌作用，尚未发现具有可治疗炎性疾病或具有炎性调节作用的细菌素。

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术中至少存在以下问题：普遍用于治疗炎性疾病的抗生素存在药物残留问题。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种凝结芽孢杆菌TK1产细菌素、其制备方法及应用，所述细菌素具备良好的抑菌作用和炎性调节作用，当替代用于治疗炎性疾病的抗生素时，可以解决药物残留问题。

具体而言，根据本发明的第一方面，本发明实施例提供了一种凝结芽孢杆菌TK1产细菌素，所述凝结芽孢杆菌TK1产细菌素分子量为11207Da。根据中国公开专利文献CN108342340A记载，所述凝结芽孢杆菌TK1于2017年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2017811。所述细菌素命名为Bacillocin TK1。

进一步的，所述细菌素的N-末端序列为GGAGMNPIDYDR(如序列表中SEQ ID NO.1所示)。

根据本发明的第二方面，本发明实施例提供了所述细菌素在制备治疗炎性疾病和/或调节炎性的药物中的应用。

具体的，所述炎性疾病为炎性肠道疾病。优选所述细菌素的使用浓度为25-75μg/mL。优选所述细菌素在炎性疾病感染前对被感染细胞进行预处理，即以预防治疗的方式进行应用。

根据本发明的第三方面，本发明实施例提供了所述细菌素在制备抑菌药物中的应用。

根据本发明的第四方面，本发明实施例提供了所述细菌素的制备方法，包括以下步骤：

(1)将所述凝结芽孢杆菌接种在MRS液体培养基中发酵，离心去除菌体，上清液用硫酸铵溶液沉淀，沉淀溶于ddH₂0水中得到细菌素粗提液；