[发明专利]凝结芽孢杆菌产细菌素TK1、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌TK1产细菌素，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌TK1产细菌素分子量为11207Da。

2.如权利要求1所述的细菌素，其特征在于，所述细菌素的N-末端序列为GGAGMNPIDYDR。

3.权利要求1或2所述的细菌素在制备治疗炎性疾病和/或调节炎性的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述炎性疾病为炎性肠道疾病。

5.权利要求1或2所述的细菌素在制备抑菌药物中的应用。

6.权利要求1或2所述细菌素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将所述凝结芽孢杆菌接种在MRS液体培养基中发酵，离心去除菌体，上清液用硫酸铵溶液沉淀，沉淀溶于ddH₂0水中得到细菌素粗提液；

(2)用琼脂糖快速流动阳离子交换柱纯化，收集具有抑菌活性的部分，用截留分子量3.5kDa的透析袋透析，冷冻干燥后用去离子水复溶、微孔滤膜过滤；

(3)用葡聚糖凝胶G50凝胶柱纯化步骤(2)所得滤液，收集具有抑菌活性的部分，冷冻干燥后用去离子水复溶、微孔滤膜过滤，得到纯化后的细菌素溶液。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中将所述凝结芽孢杆菌接种在MRS液体培养基中发酵，离心去除菌体，上清液用0.22μm滤菌膜过滤后用80％饱和度硫酸铵溶液沉淀，收集沉淀透析，沉淀冷冻干燥后溶于ddH₂0水中得到细菌素粗提液。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述凝结芽孢杆菌按1％接种量接种在MRS液体培养基中发酵。

9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中用琼脂糖快速流动阳离子交换柱纯化的具体步骤为：

用缓冲液A平衡预装柱、上样、用缓冲液A漂洗、用缓冲液A和缓冲液B梯度洗脱，收集具有抑菌活性的部分，

所述缓冲液A为20mmol·L^-1柠檬酸-柠檬酸三钠、pH 6.0的缓冲溶液；

所述缓冲液B为含20mmol·L^-1柠檬酸-柠檬酸三钠和1mol·L^-1NaCl、pH 6.0的缓冲溶液。

10.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中用葡聚糖凝胶G50凝胶柱纯化步骤(2)所得滤液的具体步骤为：

用缓冲液C平衡预装柱、上样、用缓冲液C洗脱，收集具有抑菌活性的部分，

所述缓冲液C为含20mmol·L^-1柠檬酸-柠檬酸三钠和0.15mol·L^-1NaCl、pH 6.0的缓冲溶液。