[发明专利]一种基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法及应用

权利要求书

1.一种基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，包括如下过程：

通过PCR扩增反应将含有启动子、基因编码区、poly A信号的基因表达核心组件序列拆分成2～3个线性双链DNA分子作为输入，转染入细胞中；

在所有线性双链DNA分子同时出现时，通过细胞内的连接反应，这些线性双链DNA分子重新形成完整的基因表达核心组件序列并进行基因表达。

2.如权利要求1所述的基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，包括：

步骤一、以报告基因表达质粒为模板，通过PCR扩增得到含有CMV启动子序列、含有报告基因序列和含有poly A signal序列的多个线性双链DNA分子；

步骤二、将所述线性双链DNA分子进行1％琼脂糖凝胶电泳，根据产物大小切胶以去除模板质粒，产物回收后，测定浓度；

步骤三、将所述线性双链DNA分子不同分组进行转染细胞，转染48小时后采用流式细胞术检测与门逻辑运算输出信号蛋白表达；

当所述转染细胞同时包括所述线性双链DNA分子包含CMV启动子序列组成的DNA片段、包含报告基因序列组成的DNA片段和包含poly A signal序列组成的DNA片段时，检测到蛋白表达。

3.如权利要求2所述的基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，在所述步骤一中，以报告基因表达质粒为模板，分别利用序列表中的SEQ ID NO.11和SEQID NO.12所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ ID NO.1所示序列和序列表中的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ IDNO.2所示序列的多个线性双链DNA分子；

所述报告基因表达质粒为pcDNA3.0-luc质粒。

4.如权利要求2所述的基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，在所述步骤一中，以报告基因表达质粒为模板，分别利用序列表中的SEQ ID NO.15和SEQID NO.16所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ ID NO.3所示序列和序列表中的SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ IDNO.4所示序列的多个线性双链DNA分子；

所述报告基因表达质粒为pcDNA3.0-luc质粒。

5.如权利要求2所述的基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，在所述步骤一中，以报告基因表达质粒为模板，分别利用序列表中的SEQ ID NO.19和SEQID NO.20所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ ID NO.5所示序列和序列表中的SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ IDNO.6所示序列的多个线性双链DNA分子；

所述报告基因表达质粒为pcDNA3.0-luc质粒。

6.如权利要求2所述的基于线性双链DNA分子连接的与门逻辑运算方法，其特征在于，在所述步骤一中，以报告基因表达质粒为模板，分别利用序列表中的SEQ ID NO.23和SEQID NO.24所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ ID NO.7所示序列和序列表中的SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示的引物序列通过PCR扩增得到序列表中的SEQ IDNO.8所示序列的多个线性双链DNA分子；

所述报告基因表达质粒为pEGFP-C1质粒。