[发明专利]43个STR位点的下一代测序分型试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种43个STR位点的下一代测序分型的试剂盒和方法，所述试剂盒中包括PCR扩增试剂盒，所述PCR扩增试剂盒中包括43个STR位点的79条PCR扩增单端特异性引物，所述PCR扩增单端特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.79所示。本试剂盒中的引物能够使每个基因座的多态性提高，从而提高非父排除概率和系统效能，使检测结果更准确可靠，检测结果可以为NGS‑STR分型技术的发展提供新数据，为现有技术中需要联合应用多个试剂盒STR位点才能检测目标失踪人口调查及复杂亲缘关系鉴定等案件提供新的检测方案。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及43个STR位点的下一代测序分型试剂盒及方法。

背景技术

亲子鉴定和个人识别是法医遗传学中两个主要研究内容，DNA分型技术是法医遗传学研究的主要工具。常染色体短串联重复序列(short tandem repeat，STR)是法医DNA实验室的主流遗传标记，是全球各国的大多数法庭DNA数据库的建立基础。目前，法医DNA实验室检测STR的主要技术仍然是毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)技术，采用多色荧光标记复合扩增技术同时对多个STR基因座进行分型，并通过CE进行片段长度分析，以获得STR基因座的长度信息。但是，传统的CE技术在一个复合体系中最多能够同时复合20～30个STR基因座，而且CE技术仅仅能够得到STR核心序列的长度信息。现阶段，对于失踪人口调查及复杂亲缘关系鉴定通常需要联合使用多个试剂盒的STR位点信息。

随着下一代测序技术(next generation sequencing,NGS)的发展，NGS也被考虑用于法医STR基因座的检测。但STR分型是基于荧光标记的PCR产物的大小进行等位基因的分离，在传统的复合PCR中，难以实现所有引物的熔解温度(Tm值)相近以确保所有位点的退火温度相同，使下一代测序分型(NGS-STR)技术受限。

发明内容

针对现有检测方法需要多个试剂盒联合应用、引物的Tm值难以相近而使NGS-STR分型技术受限的技术问题，本发明提供了一种43个STR位点的下一代测序分型试剂盒。

以及，本发明还提供了一种43个STR位点的下一代测序分型方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种43个STR位点的下一代测序分型试剂盒，所述下一代测序分型试剂盒包括下一代测序定制panel试剂盒，所述下一代测序定制panel试剂盒中包括43个STR位点的79条PCR扩增单端特异性引物，所述PCR扩增单端特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQID NO.79所示。

本试剂盒用于NGS-STR技术，可在一次反应体系中检测更多的STR基因座；同时，NGS技术不仅能够获得STR的长度信息，还能获得完整的序列信息，发现更多相同长度片段中存在的重复区域序列结构不一致的同等位基因，相当于增加了有效等位基因的数目，以CE群调结果的基因座等位基因频率计算，43个STR位点联合应用的二联体累计非父排除概率(cumulative probability of exclusion，CPE)大于0.999999999998208，而现有技术中试剂盒联合应用的Goldeneye 20A系统、Goldeneye 22NC系统和Microreader^TM 23sp ID系统的CPE分别为0.999993、0.999996、0.9999992359。因此，以本申请试剂盒中43个STR位点的79条单端特异性引物作为PCR扩增引物进行下一代测序分型，每个基因座的多态性提高，从而提高非父排除概率和系统效能，使检测结果更准确可靠，检测结果可以为NGS-STR分型技术的发展提供新数据，为现有技术中需要联合应用多个试剂盒STR位点才能检测目标失踪人口调查及复杂亲缘关系鉴定等案件提供新的检测方案。