[发明专利]43个STR位点的下一代测序分型试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910100089.1 | 申请日： | 2019-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN109554453A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 李淑瑾;丛斌;刘青霞;付丽红 | 申请（专利权）人： | 河北医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 米文智 |
| 地址： | 050017 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 特异性引物 测序分型 检测结果 单端 亲缘关系鉴定 核苷酸序列 联合应用 人口调查 系统效能 多态性 基因座 新数据 检测 引物 概率 案件 | ||
1.一种43个STR位点的下一代测序分型试剂盒，其特征在于：所述下一代测序分型试剂盒包括下一代测序定制panel试剂盒，所述下一代测序定制panel试剂盒中包括43个STR位点的79条PCR扩增单端特异性引物，所述PCR扩增单端特异性引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.79所示。
2.根据权利要求1所述的下一代测序分型试剂盒，其特征在于：所述下一代测序定制panel试剂盒还包括10×酶切反应缓冲液、FERA缓冲液、酶切反应中酶混合物、5×连接反应缓冲液、连接接头、DNA连接物、连接溶液、5×靶向PCR反应缓冲液、与所述79条PCR扩增单端特异性引物构成常规PCR的正反向引物、Taq DNA聚合酶和5×常规PCR反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的下一代测序分型试剂盒，其特征在于：所述下一代测序分型试剂盒还包括血液DNA提取试剂盒、Qubit dsDNA HS定量试剂盒、、实时荧光定量试剂盒和labcip质检分析试剂盒。
4.根据权利要求3所述的下一代测序分型试剂盒，其特征在于：所述下一代测序分型试剂盒还包括MiSeq上机测序试剂。
5.一种43个STR位点的下一代测序分型方法，其特征在于：用权利要求1～4任一项所述43个STR位点的下一代测序分型试剂盒进行样品检测。
6.根据权利要求5所述的下一代测序分型方法，其特征在于：所述方法至少包括以下操作步骤：
步骤a、提取待测血液的DNA，定量，采用所述79条PCR扩增单端特异性引物构建文库；
步骤b、对所述文库进行片段检测，定量；
步骤c、根据步骤b的定量结果，对文库中的样本进行均一化，然后变性、稀释，测序；
步骤d、将测序结果与hg19参考基因进行序列对比，得到分型结果。
7.根据权利要求6所述的下一代测序分型方法，其特征在于：步骤a中构建文库的操作包括DNA片段化、末端加A、连接接头、清洗、靶向富集、清洗富集产物、常规PCR扩增、清洗扩增产物；所述靶向富集的引物为79条所述PCR扩增单端特异性引物。
8.根据权利要求7所述的下一代测序分型方法，其特征在于：所述靶向富集的PCR反应循环参数为：95℃，13min；98℃，2min；98℃，15s，68℃，10min，8次循环；72℃，5min；4℃，5min。
9.根据权利要求6所述的下一代测序分型方法，其特征在于：步骤c中，测序的操作在Illumina MiSeq FGx平台进行。
10.根据权利要求9所述的下一代测序分型方法，其特征在于：步骤c中变性使用的试剂为0.2N-NaOH。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河北医科大学，未经河北医科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910100089.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
