[发明专利]一种检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物

说明书

本发明提供了一种检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物，所述引物序列如SEQ ID NO.1‑4所示。本发明在LAMP技术的基础上，选取新的靶标基因设计与筛选引物，使这个技术更准确地用于检测胶孢炭疽菌，为橄榄炭疽病的及时防治提供技术支持。

技术领域

本发明属于植物病理学领域，具体涉及一种快速检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的方法。

背景技术

胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)寄主繁多，有2200多种植物，引起炭疽病，给农业生产造成严重的经济损失。传统病原菌的分类、鉴定主要基于形态学特性、致病性测定等，但炭疽菌种间甚至种内菌株间形态变异大，近似种之间的分类特征差异微小，造成该属的分类较难操作。胶孢炭疽菌作为该属内一个主要种和重要种，从形态特征来看，具有集合种群和复合种的特征，种内菌株间变异大，有多个专化型或生理小种。由于种内菌株从形态至生理特性存在较大的变异性，使该种在鉴定上常与一些近似种混淆，为此类病害的有效防治带来很多困难和问题。同时传统分类鉴定方法耗时长、灵敏度低、易受人为及环境等诸多因素的干扰，不能在病害潜伏期和初发期做出诊断，很难对病害发生进行及时的监测和有效控制。

目前传统的病原菌形态学鉴定：费时费力，而且要求操作者需具备扎实的真菌分类学知识。由于橄榄炭疽病具有潜伏性，当橄榄果实表现症状采集样本进行分离时，已错过了最佳防治时期。以ITS为靶标的普通PCR分子检测、RAPD-PCR方法、巢式PCR技术等：这些检测方法需要的检测时间比较长，准确性、灵敏度偏低，或需要昂贵的仪器。这些缺陷使其在基层农业部门和资源不足的发展中国家的使用受到了一定的限制。根据ITS设计引物的LAMP技术：由于ITS2区域存在非同源拷贝，致使其不能真实准确地用于病原菌分类。

在LAMP检测技术研发中靶标基因的选取和引物的设计与筛选是重要环节。前人的研究认为ITS2区域存在非同源拷贝，致使其不能真实准确地用于病原菌分类，而翻译延长因子可以。翻译延长因子是在种的水平上信息量很高的单拷贝基因，利用翻译延长因子基因序列设计得到的引物非常适用于病原菌种间的鉴定。本研究利用翻译延长因子序列设计的特异性引物，可为胶孢炭疽菌的准确鉴定和快速检测提供技术和方法。对病害进行快速检测可及时防治病害，对于橄榄生产具有重要意义。

本发明在LAMP技术的基础上，选取新的靶标基因设计与筛选引物，使这个技术更准确地用于检测胶孢炭疽菌，为橄榄炭疽病的及时防治提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速检测橄榄组织中胶孢炭疽菌的LAMP检测引物，所述引物包含外引物F3/B3和内引物FIP/BIP，序列为：

F3：GGCTCCTTCAAGTACGCC；

B3：TCGGACAGCCAATTTTCAGC；

FIP：GCTCGGCCTTGAGCTTGTCAAG-GCCGTTTCTTCGCGATCC；

BIP：TCACCATCGACATTGCCCTCTG-TGAGGAAGCCAGACTTACCA。

所述的引物在检测橄榄组织中胶孢炭疽菌中的应用。

本发明的优点在于：

本发明方法适用于橄榄组织中胶孢炭疽菌的快速可靠的检测和鉴定，对于农业生产中胶孢炭疽菌引起的病害防治具有重要的实用价值。本发明与现有技术相比，具有以下的技术优势和积极效果：

1、结果可靠：本发明所设计出的LAMP检测引物，已经对不同地区的胶孢炭疽菌和带胶孢炭疽菌的植物组织进行了测试验证，因此结果可靠性具有充分的保证；