[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了检测猪组织中及猪血饲料制品中非洲猪瘟病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法，所述冻干微芯片的特征是：用于检测非洲猪瘟病毒的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；所述试剂盒包括一个冻干微芯片、一瓶矿物油、一管阳性对照、一管阴性对照、一管稀释液及一管无核酸酶水。所述引物探针组的用途为：鉴定非洲猪瘟病毒；检测待测猪组织及猪血饲料制品样本是否含有非洲猪瘟病毒。利用本发明的冻干微芯片、试剂盒和方法，已首次从猪组织和猪源性饲料中检测到ASF病毒，证实本发明对于ASF的防控具有重要应用价值，有助于发现和切断病毒传播链，有效预防大规模爆发。

技术领域

本发明涉及动物病毒检测领域，特别是涉及一种检测猪组织中和猪血饲料制品中非洲猪瘟病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine Fever，ASF)是一种病毒引起的传染病，可影响所有年龄的猪，引起出血热，急性发病时的致死率可达100％。非洲猪瘟严重威胁养猪业生产，并且因疫情引发贸易限制，对国际贸易产生重大影响。ASF具有极强的跨境传播能力，已引起各国政府和国际组织越来越多的重视。我国在2018年8月之前从未发现过ASF,并始终将其列为重点防范的外来动物疫病。

2018年8月至9月下旬，我国先后在辽宁省沈阳市沈北新区、河南省郑州市经济开发区、江苏省连云港市海州区、浙江省温州市乐清市等8个省份20个场点发现非洲猪瘟疫情。由于目前ASF尚无有效疫苗可供预防接种，对该病的及时诊断和处置，是控制和扑灭疫情的主要手段。因此，研究开发一种ASF病毒的快速、敏感、准确的诊断技术，是当前本领域的迫切需要。

此外，在疫情排查过程中，中国动物疫病预防控制中心于2018年8月30至9月7日，从江西省某饲料生产企业的12个批次猪血浆蛋白粉和猪血球蛋白粉中检测出非洲猪瘟病毒核酸，首次证实了非洲猪瘟具有通过猪源性饲料传播的潜在风险。据此，农业农村部于9月 13日发布公告，要求饲料生产企业暂停使用以猪血为原料的血液制品生产猪用饲料，加强猪用饲料监管工作。对已生产或销售的相关猪用饲料产品，按批次抽样送检。

开展饲料监管工作，对检测技术的简便、快速、特异性和敏感性要求较高。目前常用的 ASF病毒核酸检测方法是PCR和Realtime PCR；而传统的ASF 分离鉴定方法，由于存在生物安全隐患而被我国禁止使用。以上各个方法均存在操作繁琐、检测时间长且易污染等弊端。所以目前市场急需快速、准确、特异性和敏感性高，且便携、能现场操作的检测用试剂产品。

发明内容

基于本领域的上述需求，本发明的目的在于提供一种用于检测猪组织中和猪血饲料制品中非洲猪瘟病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法，能够快速、有效地对饲料中非洲猪瘟病毒进行检测，并具有准确性好、特异性强、敏感性高、可常温储存的优点。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种检测猪组织中和猪血饲料制品中猪组织中和猪血饲料制品中非洲猪瘟病毒的冻干微芯片，其特征在于，一种检测非洲猪瘟病毒的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；

所述荧光PCR反应体系包括：下述引物和探针：

F(序列表的序列1)：5’-CAGATGCCGATACCACAAG-3’；

R(序列表的序列2)：5’-GAGGAATACCAACCCAGTG-3’；

P(序列表的序列3)：5’-CAGCCGTAGTGATAGACCCCAC-3’。

所述荧光PCR反应体系还包括：Taq酶、海藻糖、Tris-Cl、dNTP、Mg2+；

优选地，所述非洲猪瘟病毒的Taqman探针的5`端标记有荧光报告基团；3`端标记有荧光淬灭基团。