[发明专利]用于检测桃黑星菌的LAMP引物及检测试剂盒

权利要求书

1.用于检测桃黑星菌（Venturia carpophila）的LAMP引物，其特征在于，包括：

外侧正向引物VC-F3：5’-AGCAAGCCCTGCCTAGA-3’；

外侧反向引物VC-B3：5’-TGCCCCCCGGAATACCA-3’；以及

内侧正向引物VC-FIP：5’-TGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAGTCTGAGGAGAAAGCC-3’；

内侧反向引物VC-BIP：5’-GATGAAGAACGCAGCGAAATGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGA-3’。

2.含有权利要求1所述LAMP引物的用于检测桃黑星菌的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Bst DNA聚合酶、Thermopol Buffer、MgSO₄、MgCl₂、甜菜碱中的至少一种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

5.权利要求1所述LAMP引物或权利要求2-4任一项所述试剂盒的以下任一应用：

i）在检测桃黑星菌中的应用；

ii）在检测由桃黑星菌引起的植物病害中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物病害包括桃疮痂病。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样品中的DNA；

2）以步骤1）中提取的DNA为模板，利用所述LAMP引物进行扩增反应；

3）分析扩增产物。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，扩增反应体系以25uL 计为：4 U Bst DNA聚合酶，2.5uL 10×ThermoPol Buffer，5 mM MgSO₄，0.8 mM dNTPs，1.2 mM VC-FIP，1.2mM VC-BIP，0.4 mM VC-F3，0.4 mM VC-B3，0.8 M甜菜碱，1uL DNA模板。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，扩增反应条件：61℃水浴锅中反应75 min。

10.根据权利要求7-9任一项所述的应用，其特征在于，步骤3）具体为：向步骤2）的扩增产物中加入SYBR Green I染料，根据显色情况判定结果：显示绿色为阳性，橙色为阴性。