[发明专利]一种人间充质干细胞的诱导组合物、诱导分化培养液及其体外诱导方法和应用

说明书

本发明提供一种人间充质干细胞的诱导组合物、诱导分化培养液及其体外诱导方法和应用，涉及神经细胞再生领域，诱导组合物包括脑源性神经营养因子、神经生长因子、表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、N2细胞培养添加剂、B27细胞培养添加剂、红景天苷和黄芪多糖。本发明提供的诱导组合物中，红景天苷、黄芪多糖和细胞因子复配，诱导分化的神经细胞含量高、活性强、周期短、成本低，能够解决在体外对人间充质干细胞诱导时分化效率低，改善诱导得到的神经细胞存活状况，对细胞的毒副作用小。利用上述诱导组合物对人间充质干细胞进行诱导，操作简便，增强分化的神经细胞活性，缩小诱导分化时间。

技术领域

本发明涉及神经细胞再生技术领域，尤其涉及一种人间充质干细胞的诱导组合物、诱导分化培养液及其体外诱导方法和应用。

背景技术

神经系统损伤的修复在临床防治上一直是棘手的问题，显微外科技术、脑立体定向技术的发展对神经功能修复提供了技术支持，极大地推动了神经损伤的防治，也提高了防治的效果。神经干细胞移植能够促进神经系统损伤后功能的恢复，而神经干细胞主要从胚胎干细胞诱导，或着是直接从发育中和成年哺乳动物的中枢神经系统中分离培养，但伦理学、安全性以及细胞的来源和数量均有限，很难满足需求，诱导分化神经样细胞的研究具有临床意义。因此寻找一种理想的、可替代神经干细胞的细胞来源已迫在眉睫。

中国专利CN2细胞培养添加剂01710674026.8公开了一种用于将脐带间充质干细胞诱导成神经干细胞的细胞培养液及其使用方法，其中的细胞培养液含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和黄芪甲苷，能够缩短间充质干细胞诱导为神经干细胞的时间。该现有技术虽然能够缩短神经干细胞的诱导时间，但是其还存在诱导为具体的神经细胞还需要时间，而且得到的诱导后神经细胞数量有限，诱导培养过程复杂等等缺陷。

发明内容

本发明为了解决如何快速、大量的将间充质干细胞诱导为神经细胞问题，提供了一种诱导组合物，利用该诱导组合物进行间充质干细胞诱导神经细胞，诱导分化的神经细胞含量高、活性强、周期短、成本低，并且运用该诱导组合物进行诱导时的工序简单、工艺稳定，为神经系统疾病的防治提供种子细胞。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种人间充质干细胞诱导为神经细胞的诱导组合物，包括脑源性神经营养因子、神经生长因子、表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、N2细胞培养添加剂、B27细胞培养添加剂、红景天苷和黄芪多糖。

优选的，所述红景天苷为红景天的水提物，所述黄芪多糖为黄芪的水提物。

本发明提供了一种人间充质干细胞诱导为神经细胞的诱导分化培养液，包括上述技术方案所述的诱导组合物和基础液体培养基；

所述诱导分化培养液中包括：脑源性神经营养因子5～30ng/mL、神经生长因子5～30ng/mL、质量百分含量0.5％～4％的表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子10～50ng/mL、体积百分含量1％～4％的N2细胞培养添加剂、B27 细胞培养添加剂10～40μg/mL、红景天苷10～40mg/L和黄芪多糖10～40mg/L。

优选的，所述基础液体培养基选自DMEM/F12培养基、DMEM培养基或α-MEM培养基。

本发明提供了一种神经细胞的体外诱导方法，包括以下步骤：

以上述技术方案所述的诱导分化培养液对3～15代的人间充质干细胞进行诱导分化，得到神经细胞；

所述诱导分化条件为：37℃、5％CO₂饱和湿度。

优选的，所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、人骨髓间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人表皮间充质干细胞或人胚胎间充质干细胞。

优选的，所述分化的神经细胞中包括星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元。