[发明专利]一种应用PEG水凝胶的复合瓣膜支架及其制备方法和其应用

说明书

本发明涉及一种应用PEG水凝胶的复合瓣膜支架及其制备方法和其应用。上述制备方法包括巯基化脱细胞猪主动脉瓣的制备、预成胶液的制备及复合瓣膜支架的制备。本发明提供的复合瓣膜支架具有抗血小板和抗血栓性能，同时，其具有良好血液相容性，并能明显降低支架在体内的炎症反应和延缓支架的降解。

技术领域

本发明涉及组织工程材料领域，尤其涉及一种应用PEG水凝胶的复合瓣膜支架及其制备方法和其应用。

背景技术

目前临床常用的心脏瓣膜替代物仍然有许多缺陷。组织工程心脏瓣膜是一种很有前景替代产品。去细胞生物支架被广泛用于组织工程与再生医学中，目前应用于临床和临床前期研究的组织工程瓣膜支架材料亦主要为去细胞生物支架。

目前已有同种异体去细胞主动脉瓣膜(CryoValve)应用于临床，且近中期临床结果较为满意。而同种异体去细胞主动脉瓣由于供体短缺限制了其广泛使用。因此猪来源的异种去细胞瓣膜成为很有前景的替代物。然而单纯的去细胞猪主动脉瓣植入体内后发生功能不全并迅速衰败。其主要的原因是去细胞猪主动脉瓣残留的异种抗原使得其植入体内后发生免疫排斥反应，大量的炎症细胞浸润并破坏去细胞支架导致其迅速衰败。此外单纯的去细胞猪主动脉瓣缺乏内皮细胞的保护，暴露的胶原纤维容易促发凝血反应而导致血小板黏附和血栓形成。

因此单纯的去细胞猪主动脉瓣需要进一步修饰改性以改善在体表现。

发明内容

针对上述问题，现提供一种应用PEG水凝胶的复合瓣膜支架及其制备方法和其应用，旨在提供一种具有抗血小板和抗血栓性能且具有良好血液相容性的瓣膜支架。

具体技术方案如下：

本发明的第一个方面是提供一种应用PEG水凝胶的复合瓣膜支架的制备方法，具有这样的特征，包括如下步骤：

步骤一、将脱细胞猪主动脉瓣浸泡在含巯基化试剂的PBS缓冲液(磷酸缓冲盐溶液)中，于室温下孵育1.2-2.5h；

步骤二、将步骤一中脱细胞猪主动脉瓣取出后用PBS缓冲液清洗三遍，以终止反应，再将其浸泡在盐酸羟胺溶液中，于室温下孵育2.5-3.5h后得到巯基化脱细胞猪主动脉瓣；

步骤三、将步骤二中巯基化脱细胞猪主动脉瓣用PBS缓冲液清洗三遍，以清洗去除残余的盐酸羟胺；

步骤四、使用4-Arm-PEG-MAL(四臂-聚乙二醇-马来酰亚胺)和基质金属蛋白酶底物肽按马来酰亚胺基与巯基比例为3:1溶解于三乙醇胺缓冲液中，制成预成胶液；

步骤五、将预成胶液涂布于巯基化脱细胞猪主动脉瓣上，并于37℃下交联反应2.8-3.6h，再用纯水清洗除去残余的试剂，即得一种复合瓣膜支架。

上述的制备方法，还具有这样的特征，步骤一PBS缓冲液中巯基化试剂的质量浓度为1.7-2.2mg/mL。

上述的制备方法，还具有这样的特征，巯基化试剂为N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫基乙酸酯(SATA)。

上述的制备方法，还具有这样的特征，步骤二中盐酸羟胺溶液浓度为0.5M。

上述的制备方法，还具有这样的特征，步骤四中4-Arm-PEG-MAL分子量为15-21KPa，基质金属蛋白酶底物肽的序列为Ac-GCRD-GPQGIWGQDGCG-NH₂。

上述的制备方法，还具有这样的特征，步骤四中三乙醇胺缓冲液的pH为7.4、浓度为4mM。

上述的制备方法，还具有这样的特征，步骤一至步骤三中PBS缓冲液为含1M EDTA(乙二胺四乙酸)、pH为7.5的PBS缓冲液。

本发明的第二个方面是提供一种根据上述制备方法制备获得的复合瓣膜支架。