[发明专利]一种TaqMan-MGB探针技术检测影响降脂药物疗效基因的方法学建立

说明书

本发明公开了一种TaqMan‑MGB探针实时荧光定量PCR技术联合检测影响降脂药物疗效基因的方法，检测待测样本中影响降脂药物疗效基因的多态性，本发明同够时检测六个SNP位点，使用的引物和TaqMan‑MGB探针特异性强，可降低PCR产物污染引起假阳性的风险操，操作简单、结果准确可靠，本发明通过检测SLCO1B1 c.521T＞C(rs4149056)、SLCO1B1 c.388A＞G(rs2302683)、SLCO1B1 c.‑910G＞A(rs4149015)、ApoE c.388T＞C(rs429358)、ApoE c.526C＞T(rs7412)和NPC1L1 c.‑18C＞A(rs41279633)这些有功能意义的突变可辅助临床医生选择合适的药物和剂量，或者避免药物相互作用的发生，使病人得到最佳的治疗效果，从而达到真正“用药个体化”的目的。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种影响降脂药物疗效基因SLCO1B1 c.521T＞C、SLCO1B1 c.388A＞G、SLCO1B1 c.-910G＞A、ApoE c.388T＞C、ApoE c.526C＞T和NPC1L1 c.-18C＞A各基因型的检测方法及其专用引物、探针，采用TaqMan/MGB探针技术，通过Real-TimePCR分析系统快速进行基因组DNA扩增和荧光信号检测。

背景技术

据统计，我国高血脂患病人数已高达1.6亿，35岁以上的人群中有2500万人同时患有高血压和高脂血症。虽然血脂异常无明显症状，一旦发病却可能造成伤残或死亡。但我国居民对血脂异常的重视度还远不够，没有意识到血脂异常的危害性，大量患有血脂异常的人未能被及时发现，多数确诊患者的血脂控制并不理想。根据对我国12个大城市的高胆固醇血症患者的调查显示，他们的血脂水平控制达标的只有26.5％，其中，冠心病患者控制达标的只有16.6％。

降脂药物能有效防治心血管疾病，但个体差异导致有些患者疗效不佳。关于中国、亚洲和欧洲人种的大规模降脂疗效研究发现，有38.5％-59.5％的患者LDL(低密度脂蛋白胆固醇)未能达到治疗目标。影响降脂疗效的因素很多，遗传因素是个体间疗效差异的一个主要原因，参与脂质代谢的蛋白、药物转运体和药物靶标的遗传多态性对降脂疗效有重要影响，如SLCO1B1、ApoE、NPC1L1。

他汀类药物是一类治疗高胆固醇血症的药物，属于3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，在目前的脂质代谢异常和动脉粥样硬化疾病的治疗指南中已被广泛推荐，是动脉粥样硬化性心血管疾病一级预防和二级预防的基石。全世界有超过两亿人服用此类药物。常用的他汀类药物有匹伐他汀(Pitavastatin)、普伐他汀(Pravastatin)，阿托伐他汀(Atorvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)等。虽然他汀类药物对心血管疾病及高血脂患者有良好的疗效，但在20多年的临床应用中，他汀类药物也存在个体差异，有些人会出现毒副作用，主要包括肝毒性、肌毒性及神经毒性等，其发生率分别为1％～3％、1.5％～3％、0.045％，其中肌毒性尤其突出，严重的可引起横纹肌溶解症(Rhabdomyolysis)甚至死亡。在联合用药时，可发生药物相互作用，能加大严重肌毒性发生率。

依折麦布(Ezetimibe)是一种可减少肠内胆固醇吸收的非他汀类药物。增添他汀药物，依折麦布可更好地发挥出持续渐进的降低LDL胆固醇水平的能力，而且可以改善心血管事件的预后。另外，降低LDL胆固醇到比以往既定更低的水平，可获得更佳的效果。

医学界希望通过对某个患者基因型的检测，确认其适合用哪种降脂药来治疗能达到最好的治疗效果，并减少副作用的发生，但要想达到这种“个体化用药”目标，还要进行许多研究。本检测试剂盒可辅助医生对几类降脂药物的选择、使用剂量、毒性反应及疗效进行预测，不仅能提高治疗疗效，还能减少不良事件的发生。