[发明专利]一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法。本发明还公开了一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法。本发明通过测试基片上染料分子的拉曼信号，实现对于禽流感病毒基因片段的特异性、高灵敏检测。对于H7或N9基因片段检测，第一试剂和第四试剂中的Capture链、Replace链和Probe链为针对H7或N9基因片段设计的核苷酸序列不同的DNA链。本发明公开的检测试剂盒制备简单、检测灵敏度高、特异性好，可同时测定甲型流感病毒的H7和N9亚型，在流感病毒检测等领域有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测和光谱学检测领域，涉及一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

近年来，人感染禽流感时有发生，且引发对人类生命的严重威胁。至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2和H7N9亚型。其中，2013年3月在人体上首次发现的致死性新禽流感H7N9亚型尤为引人关注。我国是流感的高发区，也是流感病毒易发生变异的地区之一，近年来流感的频频发生，更是直接威胁人类生命。因此，早期、准确地实施流感病毒及其亚型诊断，对明确致病病因，迅速实施抗病毒治疗以减少流感相关的发病率以及流感的社区播散尤为重要。目前，有诸多可用的方法用于流感病毒的检测，包括病毒分离、快速流感诊断试验、核酸扩增检测等。

流感病毒核酸检测是指利用聚合酶链式反应(PCR)或其他类分子生物学方法，以特定的流感病毒基因序列为检测目标，对人咽拭子、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物样本中的流感病毒进行体外定性检测。在实际的应用过程中，例如医学诊断，基因治疗中DNA浓度一般是较低的，因此进行DNA高灵敏度检测有着重要的理论和实际应用的意义。

近些年来，信号放大的检测方法被常常用来进行高灵敏，高选择性地检测低浓度的DNA。其中，杂交链式反应放大技术(HCR)，滚环扩增技术(RCA)等应用于检测信号的放大。核酸酶被广泛地用于目标分子的循环放大检测。通常核酸外切酶、核酸内切酶、聚合酶被常用来检测核酸。其中核酸外切酶III(Exo III)不需要一个特定的识别位点，可以逐步从双链DNA的3羟基末端催化去除核苷酸。它对双链DNA的3'端突出末端或单链DNA是不活跃的。

表面增强拉曼散射(SERS)技术被认为是DNA高灵敏度检测的强有力分析手段。SERS光谱用于检测和分析核酸具有诸多优势：SERS光谱具有超高的灵敏度，达到了单分子检测的水平；SERS检测对样品需求量很小，且无需特殊处理；水的拉曼散射非常弱，不会干扰样品的拉曼信号；SERS光谱可直接检测含水样品，适合生物样品检测；拉曼光谱具有分子特异性，提供了大量独特且尖锐的振动带，因此SERS光谱非常适合于多元检测。

发明内容

发明目的：本发明所要解决技术问题是提供了一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒。

本发明还要解决的技术问题是提供了流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法。

本发明还要解决的技术问题是提供了流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法。

本发明以银纳米棒阵列型SERS基片为载体，制备得到用于流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，并公开了该类试剂盒用于流感病毒基因片段的快速、联合检测方法，为拓展SERS技术在流感病毒检测中的广泛应用提供技术支持。

技术方案：为了解决现有技术存在的问题，本发明采用以下技术方案：一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，所述SERS检测试剂盒包括固相SERS基片、第一试剂和第四试剂，所述固相SERS基片是表面沉积有银纳米棒阵列的玻璃片，所述第一试剂包含能与流感病毒基因片段碱基序列完全互补的Replace链，以及能与Replace链部分碱基互补的Capture链，所述Replace链与Capture链的部分核苷酸序列互补杂交形成Replace-Capture双链；所述第四试剂为修饰有染料分子的能与Capture链互补杂交的Probe链。