[发明专利]使用修饰的封闭端DNA(ceDNA)的基因编辑在审
| 申请号： | 201880083624.0 | 申请日： | 2018-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN111527200A | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | R·M·科廷;D·克尔;P·萨马约亚;O·阿尔坎;M·J·西蒙斯 | 申请（专利权）人： | 世代生物公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N9/22;C12N15/09;C12N15/63;C12N15/64;C12N15/66;C12N15/90;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 陈文平;袁元 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 使用 修饰 封闭 dna cedna 基因 编辑 | ||
1.一种非病毒无衣壳的封闭端DNA(ceDNA)载体，其包括：
介于位于两侧的反向末端重复序列(ITR)之间的至少一种异源核苷酸序列，其中至少一种异源核苷酸序列编码至少一种基因编辑分子。
2.根据权利要求1所述的ceDNA载体，其中至少一种基因编辑分子选自核酸酶、指导RNA(gRNA)、指导DNA(gDNA)和激活RNA。
3.根据权利要求2所述的ceDNA载体，其中至少一种基因编辑分子是核酸酶。
4.根据权利要求3所述的ceDNA载体，其中所述核酸酶是序列特异性核酸酶。
5.根据权利要求4所述的ceDNA载体，其中所述序列特异性核酸酶选自核酸指导的核酸酶、锌指核酸酶(ZFN)、大范围核酸酶、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)或megaTAL。
6.根据权利要求5所述的ceDNA载体，其中所述序列特异性核酸酶是选自单碱基编辑器、RNA指导的核酸酶和DNA指导的核酸酶的核酸指导的核酸酶。
7.根据权利要求2或权利要求6所述的ceDNA载体，其中至少一种基因编辑分子是gRNA或gDNA。
8.根据权利要求2、6或7所述的ceDNA载体，其中至少一种基因编辑分子是激活RNA。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的ceDNA，其中所述核酸指导的核酸酶是CRISPR核酸酶。
10.根据权利要求9所述的ceDNA载体，其中所述CRISPR核酸酶是Cas核酸酶。
11.根据权利要求10所述的ceDNA载体，其中所述Cas核酸酶选自Cas9、切口Cas9(nCas9)和失活的Cas(dCas)。
12.根据权利要求11所述的ceDNA载体，其中所述nCas9在Cas的HNH或RuVc结构域中含有突变。
13.根据权利要求11所述的ceDNA载体，其中所述Cas核酸酶是与靶向靶基因的启动子区的gRNA形成复合物的失活的Cas核酸酶(dCas)。
14.根据权利要求13所述的ceDNA载体，其进一步包括KRAB效应子结构域。
15.根据权利要求13或权利要求14所述的ceDNA载体，其中所述dCas与可以被引导至启动子区的异源转录激活结构域融合。
16.根据权利要求15所述的ceDNA载体，其中所述dCas融合物被指导RNA引导至靶基因的启动子区，所述指导RNA募集额外的反式激活结构域以上调所述靶基因的表达。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的ceDNA载体，其中所述dCas是化脓性链球菌(S.pyogenes)dCas9。
18.根据权利要求7-17中任一项所述的ceDNA载体，其中所述指导RNA序列靶向靶基因的所述启动子，并且CRISPR使所述靶基因沉默(CRISPRi系统)。
19.根据权利要求7-17中任一项所述的ceDNA载体，其中所述指导RNA序列靶向靶基因的转录起始位点并激活所述靶基因(CRISPRa系统)。
20.根据权利要求6-19中任一项所述的ceDNA载体，其中所述至少一种基因编辑分子包括第一指导RNA和第二指导RNA。
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