[发明专利]嵌合抗原受体介导的细胞靶向

权利要求书

1.一种分离的遗传修饰的T细胞，其包含：编码嵌合抗原受体(CAR)的第一多核苷酸和包含编码融合蛋白的序列的第二多核苷酸，所述融合蛋白包含β-2-微球蛋白(B2M)蛋白和HLA-E和/或HLA-G蛋白，其中所述第一和第二多核苷酸被整合到T细胞受体中-α(TCRA)基因中。

2.如权利要求1所述的遗传修饰的T细胞，其中，内源性B2M基因在所述T细胞中失活。

3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的T细胞，其中，免疫检查点基因在所述T细胞中失活。

4.如权利要求1-3中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述第一和第二多核苷酸通过自切割P2A肽连接。

5.如权利要求1-4中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述第二多核苷酸还包含编码所述B2M和HLA-E-或HLA-G-编码序列之间的接头的序列。

6.如权利要求4所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述接头包含1、2、3、4、5或6个拷贝的G4S。

7.一种制备权利要求1-6中任一项所述的遗传修饰的T细胞的方法，所述方法包括：

使用核酸酶切割分离的T细胞中的TCR-α基因，所述核酸酶包含结合所述TCR-α基因中靶位点的DNA结合结构域；和

将包含第一和第二多核苷酸的一种或多种供体引入所述T细胞，从而使所述第一和第二多核苷酸整合到被切割的TCR-α基因中。

8.如权利要求7所述的方法，其中，所述供体还包含TCR-α基因的同源臂，所述同源臂侧接所述第一和第二多核苷酸。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中，所述供体还包含驱动所述第一和/或第二多核苷酸表达的启动子。

10.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中，所述供体还包含TCR-α增强子序列。

11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中，所述供体还包含3'非翻译区(3’UTR)和5'非翻译区(5’UTR)。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述3’UTR还包含WPRE序列。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中，所述5’UTR还包含来自非洲爪蟾蜍β球蛋白基因的序列。