[发明专利]单分子肽测序的手段和方法

权利要求书

1.一种作用于多肽的工程化的、催化活性氨肽酶，其中所述多肽通过其C-末端或通过所述多肽的第一个肽键的C-末端肽部分固定于表面上，其中所述氨肽酶裂解所述多肽的N-末端氨基酸，和其中所述氨肽酶直至所述N-末端氨基酸裂解的停留时间鉴定或分类所述N-末端氨基酸。

2.权利要求1的氨肽酶，其中所述N-末端氨基酸是衍生的N-末端氨基酸，并且其中所述氨肽酶结合并裂解所述衍生的N-末端氨基酸。

3.权利要求2的氨肽酶，其中所述N-末端氨基酸是用异硫氰酸酯或异硫氰酸酯类似物衍生的N-末端氨基酸。

4.权利要求1-3任一项的氨肽酶，其中所述N-末端氨基酸是用CITC或SPITC衍生的，并且所述氨肽酶与SEQ ID No.1或SEQ ID No.2具有至少80％序列同一性并且具有25位的甘氨酸残基，65位的丝氨酸残基，138位的半胱氨酸残基和208位的组氨酸残基。

5.权利要求4的氨肽酶，包含SEQ ID No.3或SEQ ID No.4中所示的氨基酸序列。

6.权利要求1的氨肽酶，其中所述氨肽酶与SEQ ID No.7具有至少80％序列同一性，其中在1位的甲硫氨酸残基和2位的丙氨酸残基之间插入半胱氨酸残基。

7.权利要求6的氨肽酶，其包含SEQ ID No.8或由SEQ ID No.8组成。

8.权利要求1-7任一项的氨肽酶，其进一步包含光学、电学或等离子体标记，或其中通过光学、电学或等离子体来检测所述氨肽酶。

9.权利要求1-8任一项的氨肽酶，其中所述氨肽酶是嗜热和/或耐溶剂的。

10.裂解诱导剂获得多肽的序列信息的用途，所述多肽通过其C-末端或通过所述多肽的第一个肽键的C-末端肽部分固定于表面上，其中所述裂解诱导剂在所述多肽的N-末端氨基酸上的停留时间鉴定或分类所述N-末端氨基酸。

11.根据权利要求10的用途，其中所述裂解诱导剂是催化活性的氨肽酶、异硫氰酸酯或异硫氰酸酯类似物。

12.根据权利要求11的用途，其中所述催化活性的氨肽酶是权利要求1或6-9任一项的氨肽酶，和其中N-末端氨基酸选自Leu、Met、Tyr、Arg、Pro、Gly、Lys、Ala和Val。

13.根据权利要求11的用途，其中所述催化活性的氨肽酶是权利要求2的氨肽酶，和其中所述衍生的末端氨基酸是衍生的N-末端氨基酸。

14.根据权利要求13的用途，其中所述衍生的N-末端氨基酸是用CITC或SPITC衍生的，和其中所述氨肽酶是权利要求4、5、8或9任一项的氨肽酶。

15.权利要求10-14任一项的用途，其中在单分子水平获得所述多肽的所述序列信息。

16.一种鉴定或分类多肽的N-末端氨基酸的方法，所述多肽通过其C-末端或通过所述多肽的第一个肽键的C-末端肽部分固定于表面上，所述方法包括：

a)将所述表面固定的多肽接触裂解诱导剂，其中所述裂解诱导剂结合并裂解所述多肽的N-末端氨基酸；

b)测量所述裂解诱导剂在所述N-末端氨基酸上的停留时间；

c)将所述测量的停留时间与所述裂解诱导剂和一组N-末端氨基酸特征性的一组参照停留时间值进行比较；

以鉴定或分类所述N-末端氨基酸。