[发明专利]生成哺乳动物T细胞活化诱导型合成启动子(SYN+PRO)以改善T细胞疗法

说明书

本文描述的本发明的方面涉及制造和使用用于转基因表达的诱导型启动子的方法。所述诱导型启动子衍生自NFAT‑RE诱导型系统，并且用于改善或增强T细胞存活和增殖。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年5月17日提交的美国临时专利申请号62/507,565的优先权的权益。将前述申请的全部公开整体以引用的方式明确地并入。

对序列表的参考

本申请与电子格式的序列表一起提交。将序列表作为2018年5月15日创建的名为SCRI.152WO.TXT的22kb大小的文件提供。将序列表的电子格式中的信息以引用的方式整体并入本文。

技术领域

本文描述了制造和使用用于转基因表达的诱导型启动子的方法。所述诱导型启动子衍生自NFAT-RE诱导型系统，并且用于改善或增强T细胞存活和增殖。

背景技术

在T细胞疗法中已使用了许多不同的诱导型启动子。仍持续需要显示出强信号的启动子，并且特别地，显现出对显示出高信噪比并且可反复开启的启动子的需求。

发明内容

在第一方面，提供了制造诱导型合成启动子文库的方法，其中，所述方法包括：筛选启动子，其中，筛选在CAR T细胞活化后被活化的启动子，从而产生一组经筛选的启动子；筛选转录因子应答元件，从而产生一组经筛选的转录因子应答元件；制造诱导型合成启动子文库，所述诱导型合成启动子文库包含在转录因子应答元件的CAR T细胞活化后被活化的启动子；以及合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含编码经筛选的转录因子应答元件的第一序列以及编码经筛选的启动子的第二序列。

在第二方面，提供了诱导型合成启动子。所述诱导型合成启动子包含编码转录因子应答元件的第一序列以及编码启动子序列的第二序列，任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中的一个或多个。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过与抗CD3/抗CD28抗体相互作用来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。在一些替代方式中，所述化学物质为PMA或罗奴霉素。在一些替代方式中，所述启动子包含内源性IL2最小启动子(minimal promoter)序列。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中任一项所示的序列。在一些替代方式中，所述转录因子应答元件为E2F1、EGR1、HIF1A、NFAT、LEF1、SP1、PU.1、NFKB、JUN、FOS和/或STAT4。