[发明专利]生成哺乳动物T细胞活化诱导型合成启动子(SYN+PRO)以改善T细胞疗法

权利要求书

1.一种制造诱导型合成启动子文库的方法，所述方法包括：

筛选启动子，其中，筛选在CAR T细胞活化后被活化的启动子，从而产生经筛选的启动子；

筛选转录因子应答元件，从而产生经筛选的转录因子应答元件；

制造诱导型合成启动子文库，所述诱导型合成启动子文库包含在转录因子应答元件的CAR T细胞活化后被活化的启动子；以及

合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含编码经筛选的转录因子应答元件的第一序列以及编码经筛选的启动子的第二序列。

2.一种诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子包含：

编码转录因子应答元件的第一序列；以及

编码启动子序列的第二序列，

任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中的一个或多个。

3.如权利要求2所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。

4.如权利要求3所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。

5.如权利要求2-4中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过与抗CD3/抗CD28相互作用来诱导。

6.如权利要求2-5中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。

7.如权利要求6所述的诱导型合成启动子，其中，所述化学物质为PMA或罗奴霉素。

8.如权利要求2-8中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述启动子包含内源性IL2最小启动子序列。

9.如权利要求2-8中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中任一项所示的序列。

10.如权利要求2-9中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述转录因子应答元件为E2F1、EGR1、HIF1A、NFAT、LEF1、SP1、PU.1、NFKB、JUN、FOS和/或STAT4。

11.一种用于分子表达的细胞，所述细胞包含：

载体，其中，所述载体包含如权利要求2-9中任一项所述的诱导型合成启动子；编码分子的基因；以及

编码嵌合抗原受体的序列。

12.如权利要求11所述的细胞，其中，所述分子为蛋白质、抗体、促增殖分子或可根除肿瘤的分子。

13.如权利要求11或12所述的细胞，其中，所述细胞为造血干细胞。

14.如权利要求11-13中任一项所述的细胞，其中，所述嵌合抗原受体对CD19而言是特异性的。

15.如权利要求11-14中任一项所述的细胞，其中，所述细胞为CD8+或CD4+。

16.如权利要求11-15中任一项所述的细胞，其中，所述分子的表达是可诱导的。

17.如权利要求11-16中任一项所述的细胞，其中，所述CAR包含信号转导结构域。

18.如权利要求17所述的细胞，其中，所述信号转导结构域为1G、2G或3G。

19.如权利要求2-18中任一项所述的细胞，其中，所述载体为慢病毒载体、基于转座酶的微环或纳米质粒。