[发明专利]核酸检测方法及检测用试剂

权利要求书

1.一种核酸检测方法，其是从含有靶标核酸的流体中检测靶标核酸的核酸检测方法，

其具备将具有第一核酸剪切酶和第二核酸剪切酶的检测用试剂混合到所述流体中的检测用试剂混合工序，

利用所述第一核酸剪切酶将通过所述靶标核酸与具有第一侧翼部位的第一核酸及第二核酸形成复合物而显现的第一侵入结构所附带的所述第一侧翼部位剪切，生成第三核酸，

利用所述第二核酸剪切酶将通过所述第三核酸与具有第二侧翼部位的第四核酸形成复合物而显现的第二侵入结构所附带的所述第二侧翼部位剪切，生成被剪切物。

2.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其中，

所述靶标核酸为RNA，

所述第一核酸的至少所述第一侧翼部位、所述第二核酸、所述第四核酸含有DNA。

3.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其中，

所述靶标核酸及所述第四核酸为DNA，

所述第一核酸及所述第二核酸含有RNA。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的核酸检测方法，其中，

通过所述第三核酸与具有第二侧翼部位的第四核酸与第五核酸形成复合物，显现所述第二侵入结构，

所述第五核酸含有DNA。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第二核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性小于所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性，

所述第一核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性小于所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性。

6.根据权利要求4所述的核酸检测方法，其中，

所述第二核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性与所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性相比，为90％以下，

所述第一核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性与所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性相比，为90％以下。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第一核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性小于所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第一核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性及所述第二核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性小于所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性及所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性。

9.根据权利要求8所述的核酸检测方法，其中，

所述第一核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性及所述第二核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性与所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性及所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性相比，为80％以下。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第一核酸剪切酶的浓度与所述第二核酸剪切酶的浓度相比，为9倍以下。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第一核酸剪切酶的浓度为0.27mg/mL以下。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的核酸检测方法，其中，

所述第二核酸剪切酶的浓度为0.12mg/mL以下。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的核酸检测方法，其进一步具有下述靶标核酸确认工序：

将形成侵入结构的所述第一核酸及所述第四核酸中的至少一者进行荧光标记，通过荧光强度的变化，能够检测所述侵入结构的剪切。