[发明专利]一种肺腺癌差异性表达circRNA的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种肺腺癌差异性表达circRNA的检测试剂盒及其应用。本发明发现了circRNA hsa_circ_0001640在肺腺癌组织、癌旁组织中存在差异性表达，且差异性表达显著，可用作肺腺癌诊断标志物，并针对hsa_circ_0001640设计了相应的PCR引物，通过对样品进行实时荧光定量PCR，检测该样品中是否存在hsa_circ_0001640，即可对该样品所属个体是否患有肺腺癌进行初步判断，为临床诊断和预后提供参考。本发明还发现hsa_circ_0001640具有明显的抑癌作用，可以显著抑制肺腺癌细胞的增殖侵袭能力，有望基于此开发治疗肺癌的药物。

技术领域

本发明属于医药生物领域，具体涉及一种肺腺癌差异性表达circRNA的检测试剂盒及其应用。

背景技术

肺癌是目前世界上发病率及死亡率最高的恶性肿瘤，肺腺癌(lungadenocarcinoma，LAD)是肺癌中最为常见的病理类型之一，其患者以亚洲、女性、无吸烟史、发病年龄相对较早为较为常见的特点，且肿瘤生长速度较快，可能发生早期转移。此外，由于肺癌发展的多因素性和复杂性，许多患者的治疗效果与预后结果和临床分期并不相符。因此，寻找到有助于肺癌早期诊断及预后判断相关的分子标志物是目前亟需解决的重要问题。

目前对肺癌的筛查手段主要通过影像学检查，但影像学由于普及程度以及灵敏度的局限性，患者在发现肺癌时往往已经出现了病情的转移或进展，失去早期手术的机会。例如X线对于1cm以下的肺部结节的检出率不高；胸部CT可检测出0.5cm左右的肺部结节，但射线量较X线大大增加，不利于短期复查；PET-CT虽然对肺部肿瘤的敏感性更高，但价格昂贵，且在许多地区尚未普及。对于肺部肿瘤的明确诊断，肺穿刺活检或手术病理依旧是目前的金标准，但创伤性、风险高、价格昂贵，并且不利于复查。而目前常用的肺癌相关血清肿瘤标记物，如CEA、NSE、CYFRA21-1等，往往存在特异性差的缺点。

近年来，随着高通量测序技术在RNA检测中的普及，越来越多的circRNA被检出，并且在心血管疾病、神经系统疾病、感染性疾病、肿瘤疾病等多种疾病谱中均有涉及。circRNA由于其特殊的环状结构，序列高度保守，并且结构更加稳定，因此越来越多的研究认为，circRNA的这种特殊的结构性质，可以使它成为多种疾病的理想的生物标志，以及药物治疗研究的新靶点。在肺癌方面，circRNA_100876被证实在非小细胞肺癌中的表达上调，并且与淋巴结转移、肿瘤分期以及患者预后相关；has_circ_0013958被证实在肺腺癌中表达上调，并且与肺腺癌的TMN分期以及淋巴结转移有相关性，还可以抑制miR-134的表达，从而达到调控肿瘤细胞生长的作用；Wan L等人通过实验研究发现cir-ITCH可以通过与miR-7及miR-214相互结合发挥海绵作用，从而上调亲本基因ITCH的表达，ITCH的高表达可以有效地抑制Wnt/β-Catenin途径，最终抑制肺癌的发生发展。circRNA作为体系最大的RNA家族之一，有大量的circRNA在肺癌中的作用和意义尚处于未知阶段，在肺癌方面有很大的研究空间。

发明内容

本发明提供了一类用作肺腺癌诊断标志物的circRNA，该circRNA在肺腺癌组织中存在差异表达。

本发明利用高通量测序技术对收集的肺腺癌组织和癌旁组织标本进行分析，筛选出在肺腺癌组织中表达存在异常的37种circRNA，然后利用实时荧光定量PCR对筛选得到的9种circRNA分子进行验证和进一步筛选，从中得到了1种circRNA分子。

申请人发现，这1种circRNA在肺腺癌及癌旁组织中存在显著的差异性表达，因此可作为肺腺癌诊断标志物，用于判断受检个体是否有肺腺癌的发病风险。

申请人发现，这1种circRNA与肺腺癌患者的预后情况存在显著的相关性，因此可作为肺腺癌患者预后判断的生物标志。

本发明提供了circRNA作为标志物在制备用于肺腺癌诊断或预后的试剂盒中应用，所述circRNA其编码序列如SEQ ID No:6所示。