[发明专利]一种基于高通量测序技术检测DMD基因变异的引物及其应用在审
| 申请号： | 201811633167.6 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109554443A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 任绪义;张锋;金亚南;周韵;赵铃铃 | 申请（专利权）人： | 杭州迪安医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6883;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 丁静静;肖明芳 |
| 地址： | 310030 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 高通量测序技术 外显子缺失 核酸序列 检测试剂 点突变 试剂盒 假肥大型肌营养不良症 多重PCR引物 高通量测序 内含子区域 变异信息 产前诊断 基因变异 建库技术 多重PCR 均一性 扩增子 灵敏度 外显子 一次性 重复 患儿 引物 捕获 发病率 应用 | ||
1.一种基于高通量测序技术检测DMD基因变异的PCR引物，其特征在于，包括SEQ IDNO：1～SEQ ID NO：260所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述基于高通量测序技术检测DMD基因变异的PCR引物，其特征在于，SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：260所示核苷酸序列的5’端连接有Illumina测序平台建库所需的序列。
3.根据权利要求2所述基于高通量测序技术检测DMD基因变异的PCR引物，其特征在于，正向引物5’端连接序列如SEQ ID NO：261所示；反向引物5’端连接序列如SEQ ID NO：262所示。
4.一种检测DMD基因变异的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括，SEQ ID NO：1～SEQID NO：260所示核苷酸序列。
5.检测DMD基因变异的的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将SEQ ID NO.1～SEQ ID NO：260所示核苷酸序列分为两组，SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：130所示核苷酸序列为A组引物，SEQ ID NO：131～SEQ ID NO：260所示核苷酸序列为B组引物，以样本DNA为模板，进行第一轮多重PCR，得到第一轮PCR产物；
(2)使用P5通用引物、P7index引物，以与第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR扩增，对第二轮扩增产物进行纯化，获得DMD基因变异测序文库；
(3)文库质控、高通量测序，对下机数据进行生物信息学分析。
6.根据权利要求5所述检测DMD基因变异的的方法，其特征在于，所述P5通用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:263所示，所述P7index引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:264、六个随机碱基、SEQ ID NO:265依次连接。
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